rmfi Revista mexicana de fitopatología Rev. mex. fitopatol 0185-3309 2007-8080 Sociedad Mexicana de Fitopatología A.C. 10.18781/R.MEX.FIT.2405-12 00005 Artículo Científico Sensibilidad in vitro de Sclerotium rolfsii y cuatro especies de Trichoderma, a fungicidas de uso común en el cultivo de papa (Solanum tuberosum) Herrera-Rodríguez Gabriel 1 Lugo-García Gabriel Antonio 1 Irazoqui-Acosta María Belén 2 Lara- Flores José de Jesús 2 Armenta-López Sara Elodia 2 Félix-Gastélum Rubén 3 * Beltrán-Peña Hugo 3 Mora- Romero Guadalupe Arlene 3 Universidad Autónoma de Sinaloa, Colegio de Ciencias Agropecuarias, Facultad de Agricultura del Valle del Fuerte, Calle 16 S/N Esquina Japaraqui, Juan José Ríos, El Estero, Sinaloa, México. C. P. 81110. Universidad Autónoma de Sinaloa Universidad Autónoma de Sinaloa El Estero Sinaloa 81110 Mexico Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Fuerte; Lázaro Cárdenas, 315 Pte. Col. Centro, Los Mochis Sinaloa, México C. P. 81200. Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Fuerte Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Fuerte Los Mochis Sinaloa 81200 Mexico Universidad Autónoma de Occidente, Unidad Los Mochis, Departamento de Ciencias Naturales y Exactas, Boulevard Macario Gaxiola y Carretera Internacional S/N Los Mochis, Sinaloa, México. C. P. 81223. Universidad Autónoma de Occidente Universidad Autónoma de Occidente Los Mochis Sinaloa 81223 Mexico Autor de Correspondencia: Rubén Félix-Gastélum ruben.felix@uadeo.mx 21 05 2025 May-Aug 2025 43 2 RMEXFIT240512 30 05 2024 27 03 2025 Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia Creative Commons RESUMEN

Antecedentes/Objetivo.

La pudrición blanda de tubérculos de papa, causada por Sclerotium rolfsii, es una enfermedad que se presenta en suelos con altos niveles de humedad y temperaturas superiores a los 30 °C. Para su control se usan principalmente fungicidas sintéticos. Los objetivos del presente trabajo fueron determinar la efectividad biológica de fungicidas sintéticos a diferentes concentraciones contra el hongo y la sensibilidad de cuatro especies de Trichoderma a fungicidas de uso común en papa en Sinaloa.

 Materiales y Métodos.

Se determinó la efectividad biológica in vitro de nueve fungicidas a las concentraciones de 0.01, 0.1, 1, 10 y 100 ppm contra el crecimiento micelial y formación de esclerocios de S. rolfsii; además, se determinó la sensibilidad in vitro de Trichoderma afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum y T. azevedoi a 10 fungicidas en las concentraciones de 100, 500, 1000 y 2000 ppm. Los experimentos se repitieron dos veces. Los tratamientos se distribuyeron en un arreglo completamente al azar cuyos datos se sometieron a ANOVA. La comparación de medias fue mediante la prueba de Tukey (p<0.05).

 Resultados.

Tifluzamida y Propineb a la concentración de 0.01 ppm inhibieron el crecimiento micelial de S. rolfsii en 32.7 y 12.2 %, en forma respectiva. Por otro lado, S. rolfsii produjo de 157, 164 y 164 esclerocios por caja de Petri en PDA adicionado con los fungicidas Tifluzamida, Propineb y procloraz, respectivamente a la misma concentración. En cambio, Propineb a la concentración de 100 ppm inhibió el crecimiento micelial de T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum y T. asperelloides de 0, 0, 0 y 54.9 %, en forma respectiva; mientras que la inhibición de crecimiento micelial por Tifluzamida a la misma concentración en T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum y T. asperelloides varió de 0 a 63 %. Los resultados indican que las cuatro especies de Trichoderma son compatibles a ambos fungicidas.

 Conclusión.

El efecto de Tifluzamida y Propineb en la inhibición del crecimiento micelial y la formación de esclerocios de S. rolfsii, así como la compatibilidad con las cuatro especies de Trichoderma con estos fungicidas, indica que la mezcla de Trichoderma spp. + los fungicidas, muestra un uso potencial para el control de la pudrición blanda del tubérculo de papa en campo.

 Palabras clave: Producción Calidad Esclerocios Manejo Introducción

El cultivo de papa (Solanum tuberosum) ocupa el sexto lugar en producción mundial con 470,409,159 t, obtenidas de 23,514,508 h; los principales países productores de esta hortaliza son China, India, Ucrania, Rusia y Estados Unidos (FAO, 2023); México ocupa el lugar 35 con una producción anual de 1,986,198 t, donde los principales estados productores son Sonora con 612,600 t y Sinaloa con 427,587 t anuales, lo que representa el 52.4 % de la producción nacional, con un valor de producción de 17,426,448,000 (SIAP, 2023). El cultivo es afectado por enfermedades que limitan su producción y calidad (Torrance y Talianksy, 2020; Singh et al., 2021). Destaca por su importancia la pudrición blanda causada por Sclerotium rolfsii el cual afecta alrededor de 500 especies vegetales, que se agrupan en 100 familias diferentes, destacando al tomate (Solanum lycopersicum), pepino (Cucumis sativus), cacahuate (Arachis hypogaea), papa, entre otros (Kator et al., 2015; Roca et al., 2016; Kumar et al., 2018; Paparu et al., 2020; Meena et al., 2023). En papa, la pudrición blanda de tubérculos afecta la producción en un 20 %. El hongo presenta hábitos saprofíticos y en el suelo coloniza residuos de cosecha o puede sobrevivir en forma de esclerocios, los cuales se dispersan por medio del agua, maquinaria, residuos vegetales, suelo y animales (Kator et al., 2015; Roca et al., 2016).

El manejo tradicional de la pudrición blanda de tubérculos mediante fungicidas sintéticos contamina el medio ambiente y afectan a los seres vivos (Widmer, 2019), y su uso continuo genera resistencia en los fitopatógenos, lo que conduce al incremento de concentraciones para su control (Ferreira et al., 2020).

En años recientes, han surgido avances relativos a la utilización de estrategias amigables con el ambiente para el manejo de enfermedades en diversos cultivos, donde sobresale el uso de hongos como de agentes de control biológico (Rubayet y Bhuiyan 2016; Yassin et al., 2021; Kim et al., 2023)

Los hongos del género Trichoderma son los agentes biológicos más estudiados y usados, debido a los buenos resultados en el control de enfermedades fungosas; esto se debe a la diversidad de mecanismos de acción que poseen (competencia por espacio y nutrientes, micoparasitismo y antibiosis); además, este tipo de hongo antagonista produce metabolitos secundarios que promueven el crecimiento vegetal y activan los mecanismos de defensa de las plantas, e incrementan la producción y calidad de las cosechas (Yao et al., 2023). Los tratamientos con este hongo se direccionan a la semilla, plántulas, agua de riego y follaje; por otro lado, existen estudios donde se ha comprobado la compatibilidad de Trichoderma con fungicidas sintéticos comerciales, para su uso en mezclas en elcontrol de enfermedades fungosas en diversos cultivos (Gonzalez et al., 2020; Manandhar

et al., 2020; Arain et al., 2022; Dinkwar et al., 2023).

En México no existen estudios sobre la compatibilidad de especies de Trichoderma en mezclas con fungicidas sobre todo dirigidos al control de la pudrición blanda de los tubérculos de papa. Por ello, en el presente trabajo el objetivo fue determinar la efectividad biológica in vitro de diferentes concentraciones de fungicidas sintéticos en la inhibición del crecimiento micelial y formación de esclerocios de S. rolfsii; así como el efecto in vitro de los fungicidas sobre el crecimiento micelial de Trichoderma afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum y T. azevedoi.

 Materiales y Métodos

Obtención de aislados. Se utilizaron aislados de S. rolfsii (Scr4) y de Trichoderma afroharzianum (TES24), T. asperelloides (TAM74), T. asperellum (TAF75) y T. azevedoi (TAI73), proporcionados por el banco microbiológico del Laboratorio de Diagnóstico Fitosanitario de la Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Fuerte. Los aislados se obtuvieron de suelo de parcelas comerciales donde se sembró papa en ciclos agrícolas previos en los municipios de Ahome, Sinaloa y Caborca, Sonora, México en 2019, 2020 y 2021 (Cuadro 1).

Especies y aislados de <italic>Sclerotium rolfsii</italic> y <italic>Trichoderma</italic>, sitio y año de colecta y código en el Gen Bank.
Especie/aislado Localidad Año de colecta Código en Gen Bank
Sclerotium rolfsii /Scr4 Ahome, Sinaloa/ 25.701944 -109.043333 2019 OR514113
T. asperelloides /TES24 Caborca, Sonora/31.06666 -112.338333 2020 OR521164
T. azevedoi /TAI73 Ahome, Sinaloa/25.818885 -108.956014 2021 OR521181
T. afroharzianum/TAF75 Ahome, Sinaloa/25.491445 -108.571659 2021 OR521183
T. asperellum/TAM74 Ahome, Sinaloa/ 25.491445 -108.571659 2021 OR521182

Sensibilidad in vitro de Sclerotium rolfsii a nueve fungicidas sintéticos. En este estudio se evaluó la sensibilidad in vitro de un aislado de S. rolfsii (Scr4) a los siguientes fungicidas: Tifluzamida (Summit Agro México), Tiabendazol (Arysta LifeScience México), Mancozeb (Arysta LifeScience México), Propineb (Bayer Crop Science), Procloraz (Adama, México), Propiconazol (Syngenta Agro), Tolclofos-metil (Valent), Carboxin+Captan (Arysta LifeScience) y Tiofanato de metilo (Arysta LifeScience), contra el crecimiento micelial de S. rolfsii (Scr4).

Las pruebas se realizaron mediante la técnica de alimento envenenado (Dinkwar et al., 2023), en cajas Petri de 90 mm de diámetro, con 20 mL del medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA) adicionado con las sustancias de pruebas a las concentraciones: 0.01, 0.1, 1.0, 10 y 100 ppm. Se utilizaron discos de PDA de 5 mm de diámetro con crecimiento micelial activo de tres días de edad de S. rolfsii y se transfirieron al centro de la caja Petri. Los tratamientos se distribuyeron en un diseño completamente al azar con arreglo factorial 9x5, con cinco repeticiones, donde el primer factor del arreglo fue cada uno de los nueve fungicidas y el segundo factor correspondió a las cinco concentraciones. Las cajas se sellaron con papel parafilm y se incubaron a 25 ±2 °C. El tratamiento testigo consistió en cinco cajas Petri con PDA y micelio del hongo sin fungicida.

La efectividad biológica de los fungicidas sobre el crecimiento micelial de S. rolfsii, se determinó mediante la medición de su crecimiento radial cada 24 h, después de la siembra y culminó cuando S. rolfsii llenó las cajas Petri sin fungicida.

El porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de S. rolfsii se calculó de acuerdo con la siguiente ecuación: I= C-T/C X 100, donde: I=Porcentaje de inhibición, C=Crecimiento del patógeno testigo, T=Crecimiento del patógeno en tratamiento (Vincent, 1947). El experimento se repitió en dos ocasiones.

Efecto de fungicidas sintéticos sobre la formación de esclerocios de Sclerotium rolfsii. Discos de PDA de 5 mm de diámetro con crecimiento micelial activo de S. rolfsii se transfirieron a cajas Petri de PDA que contenían fungicidas en las mismas concentraciones descritas en la sección anterior. El diseño de los tratamientos fue completamente al azar con arreglo factorial 9x5, con cinco repeticiones, donde el primer factor del arreglo fue cada uno de los nueve fungicidas y el segundo factor correspondió a las cinco concentraciones. El tratamiento testigo consistió en cinco cajas Petri con PDA con crecimiento micelial de S. rolfsii sin fungicida. El número de esclerocios se determinó a los 21 días después de la siembra. El experimento se desarrolló en dos ocasiones.

Sensibilidad in vitro de especies de Trichoderma a 10 fungicidas sintéticos. En este estudio se evaluó la sensibilidad in vitro de T. afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum y T. azevedoi a los fungicidas: 1) Tifluzamida (Summi Agro México), 2) Tiabendazol (Arysta LifeScience México), 3) Mancozeb (Arysta LifeScience México), 4) Propineb (Bayer Crop Science), 5) Procloraz (Adama, México), 6) Propiconazol (Syngenta Agro), 7) Carboxin+Captan (Arysta LifeScience México), 8) Tiofanato de metilo (Arysta LifeScience), 9) Fluazinam (Syngenta Agro) y 10) TCMTB (Summit Agro México).

El ensayo se realizó con base en la técnica descrita por Dinkwar et al. (2023), para lo cual se utilizaron cajas Petri de 90 mm de diámetro, con 20 mL de PDA conteniendo las sustancias de pruebas a las concentraciones: 100, 500, 1000 y 2000 ppm. Como inóculo, se utilizaron discos de PDA de 5 mm de diámetro con crecimiento micelial activo de cada especie de Trichoderma, los cuales se colocaron en el centro de la caja Petri. Los tratamientos se distribuyeron en un diseño experimental completamente al azar con arreglo factorial 4x10x4, con cuatro repeticiones, donde el primer factor del arreglo corresponde a cada una de las especies de Trichoderma, el segundo a los 10 fungicidas y el tercero a las cuatro concentraciones de fungicidas. Las cajas se sellaron con papel parafilm y se incubaron a 25±2 °C. El tratamiento testigo consistió en cuatro cajas Petri con PDA solo con las especies de Trichoderma sin fungicida. El experimento se desarrolló en dos ocasiones.

La efectividad biológica de los fungicidas sobre el crecimiento micelial de las cuatro especies de Trichoderma, se determinó mediante la medición de su crecimiento radial cada 24 h, después de la siembra y culminó cuando cada una de las especies de Trichoderma llenó las cajas Petri sin fungicida.

El porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de la especie de Trichoderma se calculó de acuerdo con la siguiente formula: I= C-T/C X 100, donde: I=Porcentaje de

inhibición, C=Crecimiento del antagonista testigo, T=Crecimiento del antagonista en tratamiento (Vincent, 1947).

Análisis estadísticos de datos. Considerando que los datos del experimento 1 y 2 sobre inhibición del crecimiento radial y de la producción de esclerocios de S. rolfsii en las diferentes concentraciones de los fungicidas no mostraron diferencias significativas entre ellos, además de que sus varianzas fueron homogéneas, los datos de los dos experimentos se combinaron y se analizaron como uno solo; en seguida se sometieron a ANOVA en el paquete estadístico (SAS 9.0, SAS Institute Inc., North Carolina, EUA). La comparación de medias fue mediante la prueba de Tukey (P=0.05) (Little y Hills, 1973). Los datos sobre la inhibición del crecimiento micelial de las cuatro especies de Trichoderma por los fungicidas se sometieron a los mismos análisis estadísticos.

 Resultados

Efectividad biológica in vitro de fungicidas sintéticos en la inhibición del crecimiento micelial de Sclerotium rolfsii. En el análisis de varianza factorial entre fungicidas mostró diferencias significativas (F=65687.3, P≤ 0.0001). También se reflejaron diferencias significativas (F=141381, P≤ 0.0001) entre las concentraciones de fungicidas. La interacción de fungicidas y sus concentraciones también fue significativa (F=9142.35, P≤ 0.0001), lo que implica una sensibilidad diferencial de S. rolfsii a las concentraciones de los fungicidas en estudio (Cuadro 2).

Análisis de varianza factorial del porcentaje de inhibición <italic>in vitro</italic> del crecimiento micelial de <italic>S. rolfsii</italic> a cuatro concentraciones de nueve fungicidas.
Fuente GL Suma de cuadrados Valor de F
Fungicidas 8 174055.4360z 65687.3b
Concentraciones de fungicidas 4 187313.2096 141381
Fungicidas X concentraciones de fungicidas 32 96900.0220 9142.35

zEl análisis de varianza se efectuó con datos transformados a la forma Arc sin-1 usando el tipo III de la suma de cuadrados de los procedimientos de modelo lineal generalizado (GLM) de SAS. b= Efecto significativo a P≤ 0.0001.

La inhibición del crecimiento micelial de S. rolfsii por los fungicidas Tifluzamida, Propineb y Propiconazol a la concentración de 0.01 ppm varió de 5.7 a 32.7 %, con diferencias significativas (P = 0.05) entre tratamientos, mientras que el resto de los fungicidas a las mismas concentraciones no ejercieron inhibición en el crecimiento micelial del hongo, mientras que la inhibición ejercida por los fungicidas Tifluzamida, Carboxin+Captan, Propiconazol, Propineb, Procloraz y Tiabendazol a las concentraciones 0.1 ppm varió de 6.8 a 78.1 %, con diferencias significativas (P=0.05) entre estos; a su vez los tratamientos mostraron diferencias con respecto al resto de los fungicidas, donde no ocurrió la inhibición del crecimiento micelial del hongos (Cuadro 3).

Porcentaje de inhibición promedio <italic>in vitro</italic> del crecimiento radial de <italic>Sclerotium rolfsii</italic>, causado por varios fungicidas sintéticos.
Porcentaje de inhibición de crecimiento micelial
ppm
Tifz Prop Prp C+C Prc Tia Tol Man Tio
0.01 32.7* a** 12.2 b 5.7 c 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d
0.1 78.1 a 15.0 d 18.2 c 64.2 b 14.0 d 6.8 e 0.0 f 0.0 f 0.0 f
1.0 90.7 b 16.0 e 48.0 d 93.1 a 15.8 e 7.1 f 61.4 c 0.0 g 0.0 g
10 92.4 b 26.9 d 100 a 100 a 33.0 c 17.5 f 100 a 20.7 e 6.6 g
100 93.0 b 41.1 d 100 a 100 a 100 a 20.9 e 100 a 75.0 c 8.1 f

zTif =Tifluzamida, Pro = Propineb, Prp= Propiconazol, C+C = Carboxin+Captan, Prc = Procloraz, Tia = Tiabendazol, Tol = Tolclofos-metil, Man = Mancozeb y Tio =Tiofanato de metilo.

*El número en las filas expresa el promedio del porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de S. rolfsii por cada uno de los fungicidas. **Medias con una letra común en las hileras no son significativamente diferentes (P=0.05) al someterse a la prueba de Tukey.

Los fungicidas Tifluzamida, Propineb, Propiconazol, Carboxin+Captan, Tolclofos- metil Procloraz y Tiabendazol, a la concentración de 1 ppm, ejercieron inhibición del crecimiento micelial de 7.1-93.1 %, con diferencias significativas (P=0.05) entre tratamientos; resaltando Tifluzamida y Carboxin+Captan en su efectividad biológica, mientras que Mancozeb y Tiofanato de metilo no inhibieron el crecimiento micelial del hongo (Cuadro 3).

La concentración de 10 ppm, en todos los fungicidas inhibió el crecimiento micelial del hongo, resaltando por su eficacia Propiconazol, Carboxin+Captan y Tolclofos-metil, los cuales inhibieron el 100 % del crecimiento micelial, sin diferencias significativas (P=0.05) entre estos tratamientos, pero si las hubo con respecto al resto de los fungicidas donde el crecimiento micelial varió de 6.6 a 92.4 %, donde la Tifluzamida mostró el mayor efecto inhibitorio (Cuadro 3).

Fue evidente la inhibición del crecimiento micelial de S. rolfsii por los fungicidas Tifluzamida, Propiconazol, Carboxin+Captan, Procloraz y Tolclofos-metil a la concentración de 100 ppm, con inhibición del crecimiento micelial de 93.0 a 100 %, con diferencias significativas (P=0.05) entre estos tratamientos. La inhibición micelial por los fungicidas Propineb, Tiabendazol, Mancozeb y Tiofanato de metilo varió de 8.1 a 75.0 % con diferencias significativas (P=0.05) entre éstos y a su vez con el resto de los fungicidas (Cuadro 3).

Efecto in vitro de fungicidas sintéticos sobre la formación in vitro de esclerocios de Sclerotium rolfsii. Se reflejaron diferencias significativas (F=2524.74, P≤ 0.0001) en la producción de esclerocios de S. rolfsii en PDA con los diferentes fungicidas químicos. Las cinco concentraciones también mostraron diferencias significativas (F=10146.5, P≤ 0.0001) en la producción de las estructuras de resistencia del hongo. La interacción entre los fungicidas y sus concentraciones, también fue significativa (F=642.22, P≤ 0.0001) (Cuadro 4).

Análisis de varianza factorial de producción de esclerocios por <italic>S. rolfsii</italic> en PDA con cinco concentraciones de nueve fungicidas.
Fuente GL Suma de cuadrados Valor de F
Fungicidas 9 386.840642* 2524.74b
Concentraciones de fungicidas 4 1554.645170* 10146.5
Fungicidas X concentraciones de fungicidas 36 98.400870* 642.22

*El análisis de varianza se efectuó con datos transformados a la forma Raíz cuadrada usando el tipo III de la suma de cuadrados en los procedimientos de GLM de SAS. b= Efecto significativo a P≤ 0.0001.

La producción de esclerocios varió de 157 a 180 por caja Petri en PDA con los diferentes fungicidas en la concentración de 0.01 ppm. El menor número de esclerocios ocurrió en el medio de cultivo con Tifluzamida, Propineb y Procrolaz, los cuales no mostraron diferencias significativas (P=0.05) entre ellos, pero si las hubo con respecto al resto de los fungicidas y el testigo sin fungicida donde se contabilizaron 182 esclerocios por caja Petri (Cuadro 5).

de esclerocios de <italic>Sclerotium rolfsii</italic> por caja Petri con PDA adicionado con las diferentes concentraciones de nueve fungicidas.
Fungicida/número de esclerociosz
ppm
Tify Prc Pro Tol Prp C+C Tia Man Tio Tes
0.01 157 c* 164 cb 164 cb 171 a 173 ab 174 ab 174 ab 178 a 180 a 182 a
0.1 147c 162 cb 163 abc 164 abc 171 ab 148 c 167 ab 161 cb 162 cb 182 a
1 0 e 92 c 69 d 148 b 162 b 93 c 161 b 78 d 148 b 182 a
10 0 g 75 d 0 g 30 e 129 c 0 g 146 b 22 f 131 c 182 a
100 0 d 0 d 0 d 9 c 0 d 0 d 132 b 0 d 129 b 182 a

yTif =Tifluzamida, Prc = Procloraz, Pro = Propineb, Tol = Tolclofos-metil, Prp= Propiconazol, C+C = Carboxin+Captan, TC

= TCMTB, Tia = Tiabendazol, Man = Mancozeb, Flu = Fluazinam, Tio =Tiofanato de metilo y Testigo sin fungicida. zEsclerocios en PDA con diferentes concentraciones de fungicidas a los 21 días después de la siembra. *Medias con una letra común en las hileras no son significativamente diferentes (P=0.05) de acuerdo al procedimiento de Tukey.

A la concentración de 0.1 ppm Tifluzamida y Carboxin+Captan ejercieron el mayor efecto en la inhibición de formación de esclerocios con 147 y 148 de ellos, respectivamente por caja Petri. En el resto de los tratamientos la producción de esclerocios varió de 161 a 171, con diferencias significativas (P = 0.05) entre ellos.

Sclerotium rolfsii no formó esclerocios en la concentración de 1 ppm de Tifluzamida, sin embargo, el número de esclerocios por caja Petri varió de 69 a 162 en el medio de cultivo con la misma concentración en los diferentes fungicidas. Hubo diferencias significativas (P = 0.05) entre estos tratamientos y con el respecto al tratamiento testigo, donde se produjeron 182 esclerocios por caja Petri.

No se formaron esclerocios en PDA con la concentración de 10 ppm de Tifluzamida, Propineb y Carboxin+Captan, pero si se produjeron en el medio con el resto de los fungicidas a la misma concentración, con diferencias significativas (P = 0.05) entre tratamientos, donde el número de esclerocios varió de 22 a 146 por caja Petri. La menor eficacia la mostró el Tiabendazol, pues este tratamiento mostró la mayor cantidad esclerocios.

A la concentración de 100 ppm de Tifluzamida, Procloraz, Propineb, Propiconazol, Carboxin+Captan y Mancozeb inhibieron en su totalidad la formación de esclerocios, sin diferencias significativas (P=0.05) entre tratamientos, pero si las hubo con respecto al número de esclerocios (9 a 132) que se produjeron en el medio con los fungicidas Tolclofos-metil, Tiabendazol y Tiofanato metílico a la misma concentración.

Sensibilidad in vitro de cuatro especies de Trichoderma a 10 fungicidas sintéticos. En el análisis de varianza factorial, las cuatro especies de Trichoderma mostraron diferencias significativas (F=9576.97, P≤ 0.0001) en el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial. Las especies del hongo presentaron una respuesta diferencial a los fungicidas incluidos en el presente estudio; de igual forma, los 10 fungicidas mostraron diferencias significativas (F=177350, P≤ 0.0001) en la inhibición de las especies de Trichoderma. También hubo diferencias significativas (F=24772.8, P≤ 0.0001) entre las concentraciones. La interacción entre los 10 fungicidas y sus cuatro respectivas concentraciones también fue significativa (F=5208, P≤ 0.0001); de manera similar, la interacción de las especies de Trichoderma y los 10 fungicidas también resultó significativas (F=4212.90, P≤ 0.0001). La interacción entre las especies de Trichoderma y las cuatro concentraciones de los fungicidas evaluadas arrojó diferencias significativas (F=1173.88, P≤ 0.0001). Por último, la interacción especies de Trichoderma X fungicidas X concentraciones de fungicidas también fue significativa (1211.06, P≤ 0.0001) (Cuadro 6).

Análisis de varianza factorial del porcentaje de inhibición <italic>in vitro</italic> del crecimiento micelial de cuatro especies de <italic>Trichoderma</italic> por cuatro concentraciones de diez fungicidas.
Fuente GL Suma de cuadrados Valor de F
Especies de Trichoderma 3 4044.8603* 9576.97b
Fungicidas 9 74904.1540* 177350
Concentraciones de fungicidas 3 10462.8481* 24772.8
Fungicidas X concentraciones de fungicidas 27 2199.9104* 5208.70
Especies de Trichoderma X fungicidas 27 1779.3305* 4212.90
Especies de Trichoderma X concentraciones de fungicidas 9 495.7913* 1173.88
Especies de Trichoderma X fungicidas X concentraciones de fungicidas 81 511.4926* 1211.06

*El análisis de varianza se efectuó con datos transformados a la forma Arc sen-1 usando el tipo III de la suma de cuadrados de los procedimientos de GLM de SAS. b= Efecto significativo a P≤ 0.0001.

Los fungicidas Propineb y Tifluzamida a la concentración de 100 ppm no ejercieron inhibición in vitro del desarrollo micelial de T. azevedoi (Figura 1 A y B); el resto de los fungicidas ejercieron inhibición del desarrollo micelial de 30.8 a 100 %, con diferencias significativas entre tratamientos (P=0.05). T. azevedoi mostró sensibilidad a 2000 ppm, particularmente en el caso de Propineb. Al incrementar las concentraciones de 500 a 2000 ppm, ocurrió una marcada inhibición del desarrollo micelial por Tifluzamida, pero sin inhibir el desarrollo micelial en forma total. En contraste, Fluazinam (Figura 1 C) y resto de los fungicidas inhibieron el desarrollo micelial de T. azevedoi de 88.9 a 100 %, con diferencias significativas (P=0.05) entre tratamientos (Cuadro 7).

Inhibición del crecimiento micelial de cuatro especies de <italic>Trichoderma</italic> en PDA adicionado con fungicidas sintéticos<bold>.</bold> A) <italic>T. azevedoi+</italic>Propineb 100 ppm; B) <italic>T. azevedoi</italic>+Tifluzamida 100 ppm; C) <italic>T. azevedoi+</italic>Fluazinam 100 ppm; D) <italic>T. afroharzianum+</italic>Propineb 100 ppm; E) <italic>T. afroharzianum+</italic>Propiconazol 100 ppm; F) <italic>T. asperellum</italic>+Propineb 100 ppm; G) <italic>T. asperellum+</italic>Tiabendazol 100 ppm; H) <italic>T. asperelloides+</italic>Tifluzamida 100 ppm; I) <italic>T. asperelloides+</italic>TCMTB 100 ppm.

Porcentaje de inhibición promedio <italic>in vitro</italic> del crecimiento radial de cuatro especies de <italic>Trichoderma</italic>, causado por varios fungicidas sintéticos.
ppm Porcentaje de inhibición de crecimiento micelial
Proz Tif Man C+C Flu TC Prp Prc Tia Tio
T. azevedoi 100 0.0 e 0.0 e 30.8 d 73.0 c 88.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 e 33.4 e 53.0 d 90.4 c 90.7 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 0.0 e 54.8 d 56.5 c 100 a 92.2 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 58.0 e 78.9 c 66.4 d 100 a 93.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. afroharzianum 100 0.0 g 63.3 e 37.3 f 82.2 d 92.1 c 97.3 b 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 f 69.6 d 54.2 e 85.5 c 92.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 0.0 f 82.0 d 57.4 e 87.8 c 94.3 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 88.6 c 87.0 c 73.4 d 97.0 b 95.5 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. asperellum 100 0.0 e 0.0 e 36.7 d 43.7 c 95.0 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 e 0.0 e 42.8 d 78.3 c 97.0 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 36.2 f 47.4 d 45.9 e 87.6 c 97.8 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 38.5 f 73.7 d 48.2 e 92.2 c 98.5 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. asperelloides 100 54.9 e 58.0 c 57.3 d 23.2 f 94.6 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 56.3 d 58.7 c 58.6 c 100 a 96.1 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 58.1 e 69.4 c 62.0 d 100 a 97.1 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 61.1 e 80.0 c 68.3 d 100 a 97.8 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a

zPro = Propineb, Tif =Tifluzamida, Man = Mancozeb, C+C = Carboxin+Captan, Flu = Fluazinam, TC = TCMTB, Prp= Propiconazol, Prc = Procloraz, Tia = Tiabendazol y Tio =Tiofanato de metilo.

*El número en las filas expresa el promedio del porcentaje de inhibición del crecimiento micelial T. azevedoi, T. afroharzianum,

T. asperellum y T. asperelloides por cada uno de los fungicidas.

**Medias con una letra común en las hileras no son significativamente diferentes (P=0.05) Tukey.

Al igual que en T. azevedoi, T. afroharzianum no mostró sensibilidad a Propineb a las concentraciones de 100 (Figura 1 D), 500 y 1000 ppm, pero si mostró sensibilidad a 2000 ppm. La inhibición del crecimiento micelial de T. afroharzianum se incrementó de manera gradual al incrementar las concentraciones de los fungicidas Tifluzamida, Mancozeb, Caboxin+Captan y Fluazinam. Los fungicidas Propiconazol (Figura 1 E), Procloraz, Tiabendazol y Tiofanato de metilo a las concentraciones de 100 a 2000 ppm inhibieron el 100 % del crecimiento micelial del antagonista.

Los fungicidas Propineb (Figura 1 F) y Tifluzamida a la concentración de 100 y 500 ppm no ejercieron efecto inhibitorio in vitro sobre el crecimiento micelial de T. asperellum; el hongo sólo presentó sensibilidad a la concentración de 1000 y 2000 ppm de ambos fungicidas; en cambio, Mancozeb y Carboxin+Captan ejercieron inhibición del crecimiento micelial de 36.7 a 92.2 %. El resto de los fungicidas ejerció inhibición in vitro de 95.0 al 100 % (Cuadro 7; Figura 1 G) independientemente de sus concentraciones.

El crecimiento micelial de T. asperelloides fue inhibido por las diferentes concentraciones de todos los fungicidas. Los fungicidas Propineb, Tifluzamida (Figura 1 H) y Mancozeb redujeron el crecimiento micelial 54.9 a 80.0 %; la mezcla de Carboxin+Captan a la concentración de 100 ppm inhibió el crecimiento micelial en 23.2 %, pero la misma combinación de fungicidas a las concentraciones de 500, 1000 y 2000 ppm inhibió el crecimiento micelial un 100 % (Figura 1 I); resultados similares se observaron cuando se utilizaron el resto de los fungicidas a las mismas concentraciones, donde la inhibición del crecimiento micelial varió de 94.6 a 100 % (Cuadro 7).

 Discusión

En el presente estudio Tifluzamida ejerció un mayor efecto in vitro sobre el crecimiento micelial de S. rolfsii sobre todo en la dosis de 0.1 y 0.01 ppm en las cinco concentraciones estudiadas; aun cuando no existen estudios de referencia sobre el efecto de este fungida sobre la inhibición in vitro del crecimiento micelial del hongo, estudios en China indicaron que el mismo fungicida tiene efecto preventivo contra la pudrición blanda en Dendrobium officinale (Yajun et al., 2018).

De igual manera, Propineb inhibió en un 41.1 % el crecimiento micelial del hongo, lo que coincide con estudios previos donde se utilizó la concentración de 100 ppm de dicho fungicida (Shirsole et al., 2019), el cual inhibió el 75.4 % del crecimiento micelial de S. rolfsii obtenido de garbanzo (Cicer arietinum) en la india; por otro lado, Vikram et al. (2023) evaluaron la misma molécula a 150 ppm, e inhibió 17.7 % el crecimiento micelial del hongo de plantas de trigo (Triticum spp.) en la india, lo cual contrasta con los resultados del presente estudio. Por otro lado, Mancozeb mostró inhibición del fitopatógeno un 75.0 % a la concentración de 100 ppm, lo que coincide con Shirsole et al. (2019) quienes encontraron que este fungicida inhibió el crecimiento del hongo en un 100 % a la misma concentración; mientras que Vikram et al. (2023) encontraron que el fungicida a 50 y 150 ppm, inhibió el crecimiento micelial del hongo en un 57 y 100 %, en forma respectiva. En cambio, Das et al. (2014) reportaron una inhibición de 20 % a 100 ppm, lo que contrastó con Chandra et al. (2020), quienes registraron que el mismo fungicida a 250 ppm inhibió 6.3 % del crecimiento micelial del hongo proveniente de plantas de tomate en la India. En este estudio la mezcla Carboxin+Captan inhibió totalmente a S. rolfsii a las concentraciones de 10 y 100 ppm, lo que contrastó con los resultados de Das et al. (2014), quienes determinaron que Carboxin en mezcla con Tiram, inhibió el crecimiento del hongo en un 86.4 y 100 %, respectivamente, a las mismas dosis, lo que podría deberse a una sinergia al combinar ambas moléculas.

Propiconazol ejerció efecto inhibitorio del hongo comparable con resultados consignados por Das et al. (2014) quienes evaluaron a 1, 10 y 100 ppm de dicha molécula, lo que inhibió en 27.2, 55.5 y 88.0 %, respectivamente, del crecimiento de S. rolfsii aislado de plantas de berenjena (Solanum melongena) en la India; resultados similares fueron obtenidos por Prasad et al. (2017) en la India, quienes encontraron que este mismo fungicida inhibió el 100 % del crecimiento micelial del hongo obtenido de plantas de tomate a la concentración de 150 ppm. Lo que contrasta con los resultados de Das et al. (2014) quienes indicaron que el fungicida no inhibió al crecimiento micelial del patógeno a 1, 10 y 50 ppm, pero si inhibió (19.4 %) a la concentración de 100 ppm, lo que coincide con los resultados del presente estudio donde el fungicida inhibió un 100 % a la concentración de 100 ppm.

Con relación a la producción de esclerocios por S. rolfsii en PDA, Tifluzamida, Procloraz, Propineb, Propiconazol, Carboxin+Captan y Mancozeb inhibieron la formación de esclerocios a la concentración de 100 ppm, lo cual contrastó con los fungicidas del grupo de los Benzimidazoles (Tiabendazol y Tiofanato de metilo). Estudios previos indican que el Tiabendazol a la concentración de 4,000 inhibió la formación de esclerocios de S. rolfsii obtenidos de plantas de cebolla (Allium cepa), chile (Capsicum annuum), tomate y cebada (Hordeum vulgare) (Pérez-Moreno et al., 2009), lo que coincide los resultados con esta investigación ya que la disminución en la formación de esclerocios estuvo relacionada con el incremento de las concentraciones del fungicida. Por otra parte, estudios adicionales indicaron que la evaluación in vitro de Mancozeb a 2,000 ppm redujo de 545 a 272 esclerocios de S. rolfsii obtenidos de plantas de berenjena en Bangladesh (Siddique et al., 2016), dichos resultados contrastan con lo obtenido en el presente estudio, ya que a 100 ppm se inhibió completamente la producción de esclerocios, lo cual indica variabilidad en la sensibilidad del hongo a esta molécula. Los resultados del presente estudio sugieren que Tifluzamida, Procloraz, Propineb, Propiconazol, Carboxin+Captan y Mancozeb pueden reducir la producción de esclerocios in vitro, lo que indica que estos fungicidas muestran potencial para la disminución de dichas estructuras en campo.

Los fungicidas, Propineb, Tifluzamida y Mancozeb mostraron el menor efecto en el crecimiento micelial de T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum y T. asperelloides, con respuesta diferencial de estas especies a los fungicidas y a sus respectivas concentraciones. En general, T. azevedoi y T. afroharzianum mostraron el menor efecto inhibitorio por las diferentes concentraciones de Propineb. Estos resultados concuerdan con los señalados por Manandhar et al. (2020), quienes, en Nepal, determinaron que T. harzianum y el aislado T22 in vitro a 100 ppm no se inhibieron por Propineb, mientras que T. asperellum, T. viride y el aislado T69 fueron inhibidos en un 13.1, 28.7 y 0.8 %, respectivamente; estos aislados se obtuvieron de la rizosfera de hortalizas en Nepal. Estos mismos autores registraron que Mancozeb a 100 ppm inhibió un 10.8, 16.2, 28.3, 31.2 y

46.6 %, a T. harzianum, T. viride, T. asperellum, T22 y T69, respectivamente, lo que contrasta con los hallazgos de González et al. (2020), quienes registraron que Trichoderma reesei no fue inhibido a 100 ppm.

En el presente estudio Propiconazol inhibió el 100 % del crecimiento micelial de las cepas de Trichoderma a concentración de 100 ppm. En contraste, Zapata et al. (2023), encontraron que después de cinco días del inicio del estudio, el mismo fungicida a 1.25 mL L-1 inhibió 31 % el crecimiento micelial de T. koningiopsis (Tri-cotec® WG en Colombia). Esto mismos autores registraron que Fluazinam inhibió 39.6 % a las dosis de 1 mL L-1, lo que contrasta con lo obtenido en este estudio, ya que la inhibición del crecimiento micelial de las cuatro especies de Trichoderma varió de 88.9 a 98.5 %. También registraron que Procloraz y el Tiabendazol inhibieron completamente el crecimiento micelial, lo cual también coincide con nuestros resultados.

La diferencia en la sensibilidad de los aislados de S. rolfsii y las especies de Trichoderma a los diferentes fungicidas evaluadas en este estudio y comparadas con otros trabajos de investigación podría deberse al uso constante de los fungicidas en los diferentes cultivos, donde la exposición del hongo a estos productos varía de acuerdo a manejo agronómico de la especie vegetal y a través del tiempo el hongo se adapta a altas dosis de fungicidas sintéticos, para el manejo de la enfermedad (Pérez-Moreno et al., 2009; Chaparro et al., 2011).

Los resultados del presente estudio abren nuevas líneas de investigación relacionadas con estudios de efectividad de los fungicidas a nivel de invernadero y campo; en este sentido, se debe determinar la efectividad de las moléculas que resultaron eficientes en la inhibición in vitro de S. rolfsii. También se debe de evaluar la etapa fenológica del cultivo más adecuada, así como la concentración y el número de aplicaciones para el manejo en campo de S. rolfsii causante de la pudrición blanda del tubérculo de papa.

La combinación de las especies de Trichoderma con los fungicidas Propineb y Tifluzamida y el efecto in vitro de éstos contra S. rolfsii representa una opción para el productor en el control de la pudrición blanda del tubérculo de papa. Este enfoque se ha practicado para el control de esta enfermedad en el cultivo de papa (Rubayet y Bhuiyan, 2016). Futuros proyectos deberían de orientarse hacia la disminución de la concentración de los fungicidas al mezclarse con especies antagónicas de Trichoderma, con el objetivo de reducir la contaminación del medio ambiente y sobre todo la de los tubérculos.

 Conclusiones

Los resultados indican que Thifluzamide (0.01 ppm) inhibió de manera más eficiente el crecimiento micelial de S. rolfsii (32.7%) que Propineb (12.2%). Ambos fungicidas disminuyeron la producción de esclerocios por del patógeno (157-164 esclerocios/caja Petri), mientras que la media dicha estructura de dicha estructura de resistencia fue de 182 esclerocios por caja Petri. En Trichoderma spp., Propineb (100 ppm) sólo afectó a T. asperelloides (54.9% de inhibición del crecimiento micelial), mientras Thifluzamide mostró efectos variables (0-63%), confirmando su compatibilidad con las especies de Trichoderma. Estos hallazgos sugieren que: 1) Thifluzamide es más efectivo contra S. rolfsii, pero requiere combinarse con otras estrategias para reducir la formación de esclerocios; 2) Ambos fungicidas pueden integrarse con Trichoderma en programas de manejo integrado, al mostrar baja toxicidad sobre Trichoderma spp.; 3) La selectividad de los fungicidas varía según la cepa de Trichoderma, destacando la necesidad de evaluaciones específicas. Se recomienda optimizar dosis y formulaciones para mejorar el control de S. rolfsii sin comprometer los agentes de biocontrol, priorizando esquemas que combinen ambos enfoques para un manejo sostenible.

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Background/Objective

. Soft rot of potato tubers, caused by Sclerotium rolfsii, is a disease that occurs in soils with high levels of humidity and temperatures above 30 °C. Synthetic fungicides are primarily used for its control. The objectives of this study were to determine the biological efficacy of synthetic fungicides at different concentrations against the pathogen and the sensitivity of four species of Trichoderma to commonly used fungicides in potato in Sinaloa.

 Materials and Methods.

The in vitro efficacy of nine fungicides at concentrations of 0.01, 0.1, 1, 10 and 100 ppm on mycelial growth inhibition and sclerotia formation of S. rolfsii was determined. Furthermore, the in vitro sensitivity of T. afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum, and T. azevedoi to 10 fungicides at concentrations of 100, 500, 1000, and 2000 ppm was studied. The experiment was conducted twice. Treatments were distributed in a completely randomized design and data were subjected to ANOVA. Means were compared with the Tukey test (p < 0.05).

 Results

. Thifluzamide and Propineb at the 0.01 ppm concentration inhibited mycelial growth S. rolfsii by 32.7 and 12.2%, respectively. On the other hand, S. rolfsii produced 157, 164, and 164 sclerotia per Petri dish on PDA supplemented with the fungicides. Thifluzamide, Propineb and prochloraz, respectively, at the same concentration. In contrast, Propineb at a concentration of 100 ppm inhibited the mycelial growth of T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum and T. asperelloides by 0, 0, 0 and 54.9%, respectively; while the inhibition of mycelial growth by Thifluzamide at the same concentration in T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum and T. asperelloides ranged from 0 to 63%. The results indicate that the four Trichoderma species are compatible with both fungicides.

 Conclusion

. The effect of thifluzamide and propineb on mycelial growth inhibition and sclerotia formation of S. rolfsii, as well as their compatibility with the four species Trichoderma, indicates that the combination of Trichoderma spp. and the fungicides has potential use for controlling soft rot of potato tubers under field conditions.

 Keywords: Production Quality Sclerotia Management. Introduction

The potato (Solanum tuberosum) is the sixth most widely produced crop in the world, with 470,409,159 t, obtained from 23,514,508 h. The main producing countries of this tuber are China, India, Ukraine, Russia and the United States (FAO, 2023). Mexico is in35th place, with an annual production of 1,986,198 t, with the highest-producing states are Sonora, with 612,600 t, and Sinaloa with 427,587 t a year, representing 52.4% of the national production, with a production valued in 17,426,448,000 pesos (SIAP, 2023). The crop is affected by diseases that limit its production and quality (Torrance and Talianksy, 2020; Singh et al., 2021). Soft rot stands out for its importance and is caused by Sclerotium rolfsii, which affects around 500 plant species, which are grouped into 100 different families, with tomato (Solanum lycopersicum), cucumber (Cucumis sativus), peanut (Arachis hypogaea), potato and others standing out (Kator et al., 2015; Roca et al., 2016; Kumar et al., 2018; Paparu et al., 2020; Meena et al., 2023). In the potato, soft tuber rot affects production by 20%. The fungus presents saprophytic habits and in the soil it colonizes crop residues or it can survive in the form of sclerotia, which are dispersed through water, machinery, plant residues, soil and animales (Kator et al., 2015; Roca et al., 2016).

The traditional management of tuber soft rot with synthetic fungicides contaminates the environment and affects living beings (Widmer, 2019), and its continuous use produces resistance in phytopathogens, which leads to the increase in concentrations for their control (Ferreira et al., 2020).

In recent years, advances have emerged regarding the use of environmentally friendly strategies for disease management in various crops, with the use of fungi as biological control agents standing out (Rubayet and Bhuiyan 2016; Yassin et al., 2021; Kim et al., 2023)

The fungi genus of the Trichoderma are the most widely studied and used as biological agents, due to the good results in the control of fungal diseases. This is due to the diversity of action mechanisms they have (competition for space and nutrients, mycoparasitism and antibiosis). In addition, this type of antagonistics produce secondary metabolites that promote plant growth and activate the defense mechanisms of plants, as well as increasing crop production and quality (Yao et al., 2023). Treatments with this fungus are directed to seed, seedlings, irrigation water and foliage; on the other hand, there are studies in which the compatibility of Trichoderma with commercial synthetic fungicides has been proven for use in mixtures in the control of fungal diseases in diverse crops (Gonzalez et al., 2020; Manandhar et al., 2020; Arain et al., 2022; Dinkwar et al., 2023).

In Mexico there are no studies on the compatibility of Trichoderma species in mixtures with fungicides aimed at the control of soft potato tuber rot. For this reason, the aim of this study was to determine the in vitro biological effectiveness of different concentrations of synthetic fungicides on the inhibition of mycelial growth and formation of S. rolfsii sclerotia, as well as the in vitro effect of the fungicides on the mycelial growth of Trichoderma afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum and T. azevedoi.

 Materials and Methods

Origen of isolates. S. rolfsii (Scr4) Trichoderma afroharzianum (TES24), T. asperelloides (TAM74), T. asperellum (TAF75) and T. azevedoi (TAI73) were provided by the microbiological bank of the Phytosanitary Diagnostics Laboratory of the Local Plant Health Board of the El Fuerte Velley. The isolates were obtained from soil in commercial fields in which potato was grown in previous agricultural cycles in the Municipalities of Ahome, Sinaloa and, Altar and Caborca in Sonora, Mexico in 2019, 2020 and 2021 (Table 1).

Species and isolates of <italic>Sclerotium rolfsii</italic> and <italic>Trichoderma</italic>, site and year of collection and code in the GeneBank.
Species/isolate Locality Year of collection Code in GeneBank
Sclerotium rolfsii /Scr4 Ahome, Sinaloa/ 25.701944 -109.043333 2019 OR514113
T. asperelloides /TES24 Caborca, Sonora/31.06666 -112.338333 2020 OR521164
T. azevedoi /TAI73 Ahome, Sinaloa/25.818885 -108.956014 2021 OR521181
T. afroharzianum/TAF75 Ahome, Sinaloa/25.491445 -108.571659 2021 OR521183
T. asperellum/TAM74 Ahome, Sinaloa/ 25.491445 -108.571659 2021 OR521182

In vitro sensitivity of Sclerotium rolfsii to nine synthetic fungicides. This study evaluated the in vitro sensitivity of S. rolfsii (isolate Scr4) to the following fungicides: Thifluzamide (Summit Agro Mexico), Thiabendazole (Arysta LifeScience Mexico), Mancozeb (Arysta LifeScience Mexico), Propineb (Bayer Crop Science), Prochloraz (Adama, Mexico), Propiconazole (Syngenta Agro), Tolclofos-methyl (Valent), Carboxin+Captan (Arysta LifeScience) and Thiophanate-methyl (Arysta LifeScience), against the mycelial growth of the fungal isolate.

The tests were performed using the poisoned food technique (Dinkwar et al., 2023), in Petri dishes, 90 mm in diameter, with 20 mL of the Potato Dextrose Agar (PDA) culture medium, supplemented with the test substances at the concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10 and 100 ppm. PDA discs (5 mm in diameter) with a three-day active mycelial growth of S. rolfsii were used and transferred to the center of the Petri dish. The treatments were distributed in a completely randomized design with a 9x5 factorial arrangement, in which the first factor of the arrangement was each one of the nine fungicides and the second factor consisted of the five concentrations. The dishes were sealed with parafilm and incubated at 25 ±2 °C. The control consisted of five Petri dishes with PDA and fungal mycelium without fungicide.

The biological effectiveness of the fungicides on the mycelial growth of S. rolfsii was determined by measuring radial growth of the fungus every 24 h, after its transfer and ended when S. rolfsii filled the Petri dishes without any fungicide.

The percentage of inhibition of the mycelial growth of S. rolfsii was calculated according to the equation I= C-T/C X 100, where I=Percentage of inhibition, C=Growth of the control pathogen, T=Growth of the pathogen under treatment (Vincent, 1947). The experiment was performed twice.

Effect of synthetic fungicides on the formation of sclerotia by S. rolfsii. PDA discs, 5 mm in diameter with an active S. rolfsii mycelial growth were transfered onto PDA Petri dishes containing fungicides in the same concentrations described in the previous section. The design of the treatments was completely at random with a 9x5 factorial arrangements, with five replicates, in which the first factor of the arrangement was each one of the nine fungicides and the second factor was the five concentrations. The control treatment consisted of five Petri dishes with PDA with S. rolfsii mycelial growth without any fungicide. The number of sclerotia was determined 21 days of incubatiton. The experiment was performed twice.

In vitro sensitivity of Trichoderma to 10 synthetic fungicides. This study evaluated the in vitro sensitivity of T. afroharzianum, T. asperelloides, T. asperellum and T. azevedoi to the fungicides 1) Thifluzamide (Summi Agro Mexico), 2) Thiabendazole (Arysta LifeScience Mexico), 3) Mancozeb (Arysta LifeScience Mexico), 4) Propineb (Bayer Crop Science), 5) Prochloraz (Adama, Mexico), 6) Propiconazole (Syngenta Agro), 7) Carboxin+Captan (Arysta LifeScience Mexico), 8) Thiophanate-methyl (Arysta LifeScience), 9) Fluazinam (Syngenta Agro) and 10) TCMTB (Summit Agro Mexico).

The trial was performed based on procedures described by Dinkwar et al. (2023), and for this purpose, Petri dishes with a diameter of 90 mm and 20 mL of PDA containing the test substances were used in the following concentrations: 100, 500, 1000 and 2000 ppm. PDA discs, 5 mm in diameter with an active mycelial growth of each species of Trichoderma were used, which were placed in the center of the Petri dish. The treatments were distributed in a completely randomized experimental design and with a 4x10x4 factorial arrangement, with four repetitions, in which the first factor of the arrangement corresponded to each one of the Trichoderma species, the second one was the 10 fungicides and the third one, the four concentrations of fungicides. The dishes were sealed with parafilm and incubated at 25±2 °C. The control consisted on four Petri dishes with PDA with the Trichoderma species without fungicide. The experiment was performed twice.

The biological effectiveness of the fungicides on the mycelial growth of the four Trichoderma species was determined by measuring their radial growth every 24 h after during the experimental period and culminated when each of the Trichoderma species filled the Petri dishes without fungicide.

The percentage of inhibition of the mycelial growth of the Trichoderma species was calculated according to the formula I= C-T/C X 100, where I=Percentage of inhibition, C=Growth of the control antagonist, T=Growth of the antagonist under treatment (Vincent, 1947).

Statistical analysis of data. Considering that the data of the experiments 1 and 2 on the inhibition of the radial growth and the production of sclerotia by S. rolfsii in the different concentrations of the fungicides did not display significant differences between them, in addition to their variances being homogenous, the data of both experiments were combined, analyzed as a single one. The data were subjected to an ANOVA in the statistical package (SAS 9.0, SAS Institute Inc., North Carolina, USA). The comparison of means was performed using Tukey’s test (P=0.05) (Little and Hills, 1973). The data on the inhibition of mycelial growth of the four Trichoderma species by the fungicides were subjected to the same statistical analyses.

 Results

Biological in vitro effectiveness of synthetic fungicides in the inhibition of mycelial growth in Sclerotium rolfsii. The factorial variance analysis between fungicides displayed significant differences (F=65687.3, P≤ 0.0001). Significant differences (F=141381, P≤ 0.0001) were also reflected between fungicidal concentrations. The interaction of fungicides and their concentrations was also significant (F=9142.35, P≤ 0.0001), which implies a differential sensitivity of S. rolfsii to the concentrations of the fungicides under study (Table 2).

Factorial analysis of variance of the percentage of <italic>in vitro</italic> inhibition of the mycelial growth in <italic>S. rolfsii</italic> to four concentrations of nine fungicides.
Source Sdf SSum of squares SF values
Fungicides 8 174055.4360z 65687.3b
Concentrations of fungicides 4 187313.2096 141381
Fungicides X concentrations of fungicides 32 96900.0220 9142.35

zThe analysis of variance was performed with data transformed into the Arc sin-

1 form, using Type III sum of squares from SAS’s generalized linear model (GLM) procedures. b= Significant effect at P≤ 0.0001.

The inhibition of the mycelial growth of S. rolfsii by the fungicides Tifluzamide, Propineb and Propiconazole at the concentration of 0.01 ppm varied between 5.7 and 32.7%, with significant differences (P = 0.05) between treatments, whereas the rest of the fungicides at the same concentrations exerted no inhibition in the mycelial growth of the fungus, while the inhibition exerted by the fungicides Thifluzamide, Carboxin+Captan, Propiconazole, Propineb, Prochloraz and Thiabendazole at 0.1 ppm concentrations varied between 6.8 and 78.1%, with significant differences (P=0.05) between them. In turn, the treatments displayed differences with the rest of the fungicides, where there was no inhibition of the mycelial growth of the fungus (Table 3).

The fungicides Thifluzamide, Propineb, Propiconazole, Carboxin+Captan, Tolclofos-methyl, Prochloraz and Thiabendazole, at a concentration of 1 ppm, inhibited the mycelial growth by 7.1-93.1%, with significant differences (P=0.05) between treatments. Thifluzamide and Carboxin+Captan stand out for their biological effectiveness, whereas Mancozeb and Thiophanate methyl did not inhibit the mycelial growth of the fungus (Table 3).

percentage of <italic>in vitro</italic> inhibition of the radial growth of <italic>Sclerotium rolfsii</italic>, caused by various synthetic fungicides.
Percent of inhibition of mycelial growth
ppm
Tifz Prop Prp C+C Prc Tia Tol Man Tio
0.01 32.7* a** 12.2 b 5.7 c 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d 0.0 d
0.1 78.1 a 15.0 d 18.2 c 64.2 b 14.0 d 6.8 e 0.0 f 0.0 f 0.0 f
1.0 90.7 b 16.0 e 48.0 d 93.1 a 15.8 e 7.1 f 61.4 c 0.0 g 0.0 g
10 92.4 b 26.9 d 100 a 100 a 33.0 c 17.5 f 100 a 20.7 e 6.6 g
100 93.0 b 41.1 d 100 a 100 a 100 a 20.9 e 100 a 75.0 c 8.1 f

zTif =Thifluzamide, Pro = Propineb, Prp= Propiconazole, C+C = Carboxin+Captan, Prc = Prochloraz, Tia = Thiabendazole, Tol = Tolclofos-methyl, Man = Mancozeb and Tio =Thiophanate-methyl.

*The number in the row expresses the average percentage of mycelial growth inhibition in S. rolfsii for each one of the fungicides. **Means with a common letter in the rows are not significantly different (P=0.05) when placed under Tukey’s test.

The concentration of 10 ppm in all fungicides inhibited the mycelial growth of the fungus, with Propiconazole, Carboxin+Captan and Tolclofos-methyl standing out for their efficiency, since they inhibited 100% of the mycelial growth with no significant differences (P=0.05) between these treatments, although there were differences compared to the other fungicides, where mycelial growth ranged from 6.6 to 92.4%, with Thifluzamide showing the greatest inhibiting effect (Table 3).

The inhibition of the mycelial growth of S. rolfsii by fungicides Tifluzamide, Propiconazole, Carboxin+Captan, Prochloraz y Tolclofos-methyl at a concentration of 100 ppm was evident, with inhibitions of the mycelial growth of 93.0 to 100%, with significant differences (P=0.05) among these treatments. The mycelial inhibition by the fungicides Propineb, Tiabendazol, Mancozeb and Thiophanate-methyl varied from 8.1 to 75.0% with significant differences (P=0.05) among them and also with the rest of the fungicides (Table 3)

In vitro effect of synthetic fungicides on the in vitro formation of Sclerotium rolfsii sclerotia. Significant differences (F=2524.74, P≤ 0.0001) were reflected in the production of S. rolfsii sclerotia in PDA with the different chemical fungicides. The five concentrations also displayed significant differences (F=10146.5, P≤ 0.0001) in the productions of the fungal resistance structures. The interaction between the fungicides and their concentrations was also significant (F=642.22, P≤ 0.0001) (Table 4).

The production of sclerotia varied between 157 and 180 per Petri dish in PDA with the different fungicides in the concentration of 0.01 ppm. The lowest number of slcerotia occurred in the culture medium with Thifluzamide, Propineb and Prochloraz, whcih displayed no significant differences (P=0.05) between them, but there were differences with the rest of the fungicides and the control without fungicide, where 182 sclerotia were counted for each Petri dish (Table 5).

Factorial analysis of variance of sclerotia production by <italic>S. rolfsii</italic> in PDA with five concentrations of nine fungicides.
Source df Sum of squares F values
Fungicides 9 386.840642* 2524.74b
Concentrations of fungicides 4 1554.645170* 10146.5
Fungicides X concentrations of fungicides 36 98.400870* 642.22

*The analysis of variance was carried out with data transformed to the square root form using type III of the sum of squares in SAS’s GLM procedures. b= Significant effect at P≤ 0.0001.

The concentration of 0.1 ppm of Thifluzamide and Carboxin+Captan exerted the greatest effect in the inhibition of the formation of sclerotia with 147 and 148, respectively for every Petri dish. In the rest of the treatments, the production of sclerotia varied between 161 and 171, with significant differences (P = 0.05) between them.

Sclerotium rolfsii formed no sclerotia in the concentration of 1 ppm of Thifluzamide, although the number of sclerotia for each Petri dish varied between 69 and 162 in the culture medium with the same concentration in the different fungicides. There were significant differences (P = 0.05) between these treatments and with the control treatment, where 182 sclerotia were produced per Petri dish.

No sclerotia were formed in PDA with the concentration of 10 ppm of Thifluzamide, Propineb and Carboxin+Captan, but they did form in the medium with the rest of the fungicides at the same concentration, with significant differences (P = 0.05) between treatments, where the number of sclerotia varied between 22 and 146 per Petri dish. The lowest efficiency was displayed by Thiabendazole, since this treatment displayed the lowest number of sclerotia.

Production of <italic>Sclerotium rolfsii</italic> sclerotia per Petri dish with PDA added with the different concentrations of nine fungicides.
Fungicides/number of sclerrotia
ppm
Tify Prc Pro Tol Prp C+C Tia Man Tio Tes
0.01 157 c* 164 cb 164 cb 171 a 173 ab 174 ab 174 ab 178 a 180 a 182 a
0.1 147c 162 cb 163 abc 164 abc 171 ab 148 c 167 ab 161 cb 162 cb 182 a
1 0 e 92 c 69 d 148 b 162 b 93 c 161 b 78 d 148 b 182 a
10 0g 75 d 0 g 30 e 129 c 0 g 146 b 22 f 131 c 182 a
100 0 d 0 d 0 d 9 c 0 d 0 d 132 b 0 d 129 b 182 a

yTif =Tifluzamide, Prc = Prochloraz, Pro = Propineb, Tol = Tolclofos-methyl, Prp= Propiconazole, C+C = Carboxin+Captan, TC = TCMTB, Tia = Thiabendazole, Man = Mancozeb, Flu = Fluazinam, Tio =Thiophanate-methyl and control without fungicide. zSclerotia in PDA with different concentrations of fungicides 21 days of incubation. *Means with a common letter in the rows are not significantly different (P=0.05) according to Tukey’s procedure.

In the concentration of 100 ppm of Thifluzamide, Prochloraz, Propineb, Propiconazole, Carboxin+Captan and Mancozeb completely inhibited the formation of sclerotia, without any significant differences (P=0.05) between treatments, although there were differences with the number of sclerotia (9 to 132) produced in the medium with the fungicides Tolclofos-methyl, Thiabendazole and Thiophanate-methyl at the same concentration.

In vitro sensitivity of four Trichoderma species to 10 synthetic fungicides. In the factorial analysis of variance, the four Trichoderma species displayed significant differences (F=9576.97, P≤ 0.0001) in the percentage of inhibition of the mycelial growth. The species of the fungus displayed a differential response to the fungicides included in this study. Likewise, the 10 fungicides displayed significant differences (F=177350, P≤ 0.0001) in the inhibition of the Trichoderma species. There were also significant differences (F=24772.8, P≤ 0.0001) between the concentrations. The interaction between the 10 fungidides and their four respective concentrations was also significant (F=5208, P≤ 0.0001). Similarly, the interaction of the Trichoderma species and the 10 fungicides was also significant (F=4212.90, P≤ 0.0001). The interaction between the species of Trichoderma and the four concentrations of fungicide evaluated displayed significant differences (F=1173.88, P≤ 0.0001). Finally, the interaction Trichoderma species X fungicides X concentrations of fungicides was also significant (1211.06, P≤ 0.0001) (Table 6).

Factorial analysis of variance of the percentage of <italic>in vitro</italic> inhibition of the mycelial growth of four <italic>Trichoderma</italic> species by four concentrations of ten fungicides.
Source gl Sum of squares values
Species of Trichoderma 3 4044.8603* 9576.97b
Fungicides 9 74904.1540* 177350
Concentrations of fungicides 3 10462.8481* 24772.8
Fungicides X concentrations of fungicides 27 2199.9104* 5208.70
Species of Trichoderma X fungicides 27 1779.3305* 4212.90
Species of Trichoderma X concentrations of fungicides 9 495.7913* 1173.88
Species of Trichoderma X fungicides X concentrations of fungicides 81 511.4926* 1211.06

*The analysis of variance was performed with data transformed into the Arc sen-1 form, using Type III sum of squares from SAS’s GLM procedures. b= Significant effect at P≤ 0.0001.

The fungicides Propineb and Tifluzamide at a concentration of 100 ppm did not lead to an in vitro inhibition of the mycelial growth of T. azevedoi (Figure 1 A and B); the rest of the fungicides inhibited mycelial growth from 30.8 to 100%, with significant differences between treatments (P=0.05). T. azevedoi displayed sensitivity to 2000 ppm, particularly in the case of Propineb. Increasing the concentrations of 500 to 2000 ppm led to an increased inhibition of the mycelial growth by Thifluzamide, but without completely inhibiting the mycelial development. By contrast, Fluazinam (Figure 1 C) and the rest of the fungicides inhibited the mycelial development of T. azevedoi from

88.9 to 100%, with significant differences (P=0.05) between treatments (Table 7).

Similar to T. azevedoi, T. afroharzianum displayed no sensitivity to Propineb in the concentrations of 100 (Figure 1 D), 500 and 1000 ppm, although it did display a sensitivity to 2000 ppm. The inhibition of the mycelial growth of T. afroharzianum increased gradually when increasing the concentrations of the fungicides Thifluzamide, Mancozeb, Caboxin+Captan and Fluazinam. The fungicides Propiconazol (Figure 1 E), Prochloraz, Thiabendazole and Thiophanate-methyl at concentrations of 100 to 2000 ppm inhibited 100% of the mycelial growth of the antagonist.

Inhibition of the mycelial growth of four <italic>Trichoderma</italic> species in PDA added with synthetic fungicides<bold>.</bold> A) <italic>T. azevedoi+</italic>Propineb 100 ppm; B) <italic>T. azevedoi</italic>+Tifluzamide 100 ppm; C) <italic>T. azevedoi+</italic>Fluazinam 100 ppm; D) <italic>T. afroharzianum+</italic>Propineb 100 ppm; E) <italic>T. afroharzianum+</italic>Propiconazole 100 ppm; F) <italic>T. asperellum</italic>+Propineb 100 ppm; G) <italic>T. asperellum+</italic>Thiabendazole 100 ppm; H) <italic>T. asperelloides+</italic>Tifluzamide 100 ppm; I) <italic>T. asperelloides+</italic>TCMTB 100 ppm.

The fungicides Propineb (Figure 1 F) and Thifluzamide at concentrations of 100 and 500 ppm ndid not exert an in vitro inhibiting effect on the mycelial growth of T. asperellum. The fungus only displayed sensitivity to the concentrations of 1000 and 2000 ppm of both fungicides, whereas Mancozeb and Carboxin+Captan inhibited mycelial growth by 36.7 to 92.2%. The rest of the fungicides exerted an in vitro inhibition of 95.0 to 100% (Table 7; Figure 1 G), regardless of their concentrations.

Means of percentage of <italic>in vitro</italic> inhibition of the radial growth of four <italic>Trichoderma</italic> species, caused by various synthetic fungicides.
ppm Percent of inhibition of mycelial growth
Proz Tif Man C+C Flu TC Prp Prc Tia Tio
T. azevedoi 100 0.0 e 0.0 e 30.8 d 73.0 c 88.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 e 33.4 e 53.0 d 90.4 c 90.7 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 0.0 e 54.8 d 56.5 c 100 a 92.2 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 58.0 e 78.9 c 66.4 d 100 a 93.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. afroharzianum 100 0.0 g 63.3 e 37.3 f 82.2 d 92.1 c 97.3 b 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 f 69.6 d 54.2 e 85.5 c 92.9 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 0.0 f 82.0 d 57.4 e 87.8 c 94.3 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 88.6 c 87.0 c 73.4 d 97.0 b 95.5 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. asperellum 100 0.0 e 0.0 e 36.7 d 43.7 c 95.0 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 0.0 e 0.0 e 42.8 d 78.3 c 97.0 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 36.2 f 47.4 d 45.9 e 87.6 c 97.8 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 38.5 f 73.7 d 48.2 e 92.2 c 98.5 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
T. asperelloides 100 54.9 e 58.0 c 57.3 d 23.2 f 94.6 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
500 56.3 d 58.7 c 58.6 c 100 a 96.1 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
1000 58.1 e 69.4 c 62.0 d 100 a 97.1 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a
2000 61.1 e 80.0 c 68.3 d 100 a 97.8 b 100 a 100 a 100 a 100 a 100 a

zPro = Propineb, Tif =Thifluzamide, Man = Mancozeb, C+C = Carboxin+Captan, Flu = Fluazinam, TC = TCMTB, Prp= Propiconazole, Prc = Prochloraz, Tia = Thiabendazole and Tio =Tiophanate-methyl.

*The number in the rows expresses the mean percentage of growth inhibition in T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum and T. asperelloides for each one of the fungicides.

**Means with a common letter in the rows are not significantly different (P=0.05) according to Tukey´s procedure.

The mycelial growth of T. asperelloides was inhibited by the different concentrations of all fungicides. The fungicides Propineb, Thifluzamide (Figure 1 H) and Mancozeb reduced mycelial growth 54.9 to 80.0%. The mixture of Carboxin+Captan at a concentration of 100 ppm inhibited mycelial growth by 23.2%, but the same combination of fungicides at concentrations of 500, 1000 and 2000 ppm inhibited mycelial growth by 100% (Figure 1 I). Similar results were observed when the rest of the fungicides were used at the same concentrations, where the inhibition of the mycelial growth varied between 94.6 and 100 % (Table 7).

 Discussion

In this study Thifluzamide had a greater in vitro effect on the mycelial growth of S. rolfsii, especially in the dose of 0.1 and 0.01 ppm in the five concentrations studied: despite the lack of any reference studies on the effect of this fungicide on the in vitro inhibition of the mycelial growth of the fungus, studies carried out in China indicated that the same fungicide has a preventative effect against soft rot in Dendrobium officinale (Yajun et al., 2018).

Likewise, Propineb inhibited the mycelial growth of the fungus by 41.1%, which coincides with previous studies in which the concentration of 100 ppm of this fungicide was used (Shirsole et al., 2019), and which inhibited 75.4% of the mycelial growth of

S. rolfsii obtained from chickpea (Cicer arietinum) in India. In turn, Vikram et al. (2023) evaluated the same molecule at 150 ppm, and it inhibited the mycelial growth of the fungus in wheat plants (Triticum spp.) in India by 17.7%, which contrasts with the results from this study. On the other hand, Mancozeb displayed an inhibition of 75.0% of the phytopathogen at a concentration of 100 ppm, which coincides with Shirsole et al. (2019), who found that this fungicide inhibited the growth of the fungus by 100% at the same concentration, whereas Vikram et al. (2023) found that the fungicide, at 50 and 150 ppm, inhibited they mycelial growth of the fungus by 57 and 100%, respectively. However, Das et al. (2014) reported an inhibition of 20% at 100 ppm, which contrasted with Chandra et al. (2020), who recorded that the same fungicide at 250 ppm inhibited 6.3% of the mycelial growth of the fungus from tomato plants in India. In this study, the Carboxin+Captan mixture completely inhibited S. rolfsii at concentrations of 10 and 100 ppm, which contrasted with the results by Das et al. (2014), who determined that Carboxin mixed with Tiram inhibited the growth of the fungus by 86.4 and 100%, respectively, at the same dose, which may be due to a synergy when combining both molecules.

Propiconazole exerted an inhibitory effect, comparable to the results by Das et al. (2014) who evaluated at 1, 10 and 100 ppm of this molecule, which inhibited the growth of S. rolfsii isolated from eggplant (Solanum melongena) in India by 27.2, 55.5 and respectively. Similar results were obtained by Prasad et al. (2017) in India, who found that this fungicide inhibited the mycelial growth of the fungus obtained from tomato plants by 100% at a concentration of 150 ppm. This contrasts with the results by Das et al. (2014), who indicated that the fungicide did not inhibit the mycelial growth of the pathogen at 1, 10 and 50 ppm, although it did inhibit (19.4%) at a concentration of 100 ppm, which coincides with the results of this study, in which the fungicide inhibited by 100% at a concentration of 100 ppm.

In relation to the production of sclerotia by S. rolfsii en PDA, Thifluzamide, Prochloraz, Propineb, Propiconazole, Carboxin+Captan and Mancozeb inhibited the formation of sclerotia in the concentration of 100 ppm, which contrasted with the fungicides of the group of Benzimidazoles (Thiabendazole and Thiophanate-methyl). These eariler studies indicate that Thiabendazole at a concentration of 4,000 inhibited the formation of S. rolfsii sclerotia obtained from onion (Allium cepa), chilli pepper (Capsicum annuum), tomato and barley (Hordeum vulgare) plants (Pérez-Moreno et al., 2009), which coincides with the results of this investigation, since the reduction in the formation of sclerotia was related with the increase in the concentrations of the fungicide. On the other hand, additional studies indicated that the in vitro evaluation of Mancozeb at 2,000 ppm reduced from 545 to 272 the S. rolfsii sclerotia obtained from eggplant plants in Bangladesh (Siddique et al., 2016). These results contrast with those obtained in this study, since at 100 ppm, the production of sclerotia was completely inhibited, indicating variability in the sensitivity of the fungus to this molecule. The results of this study suggest that Thifluzamide, Prochloraz, Propineb, Propiconazole, Carboxin+Captan and Mancozeb can reduce the in vitro production of sclerotia, indicating that these fungicides display potential for the reduction of these structures in the field.

The fungicides Propineb, Thifluzamide and Mancozeb displayed the lowest effect on mycelial growth in T. azevedoi, T. afroharzianum, T. asperellum and T. asperelloides, with a differential response of these species to the fungicides and their respective concentrations. In general, T. azevedoi and T. afroharzianum displayed the lowest inhibiting effect due to the different concentrations of Propineb. These results coincide with those by Manandhar et al. (2020), who, in Nepal, determined that T. harzianum and the isolation T22 in vitro at 100 ppm were not inhibited by Propineb, whereas T. asperellum, T. viride and the isolation T69 were inhibited by 13.1, 28.7 and 0.8%, respectively; these isolations were obtained from the rhizosphere of vegetable orchards in Nepal. These authors recorded that Mancozeb at 100 ppm inhibited T. harzianum, T. viride, T. asperellum, T22 and T69 by 10.8, 16.2, 28.3, 31.2 y 46.6%, respectively, which contrasts with findings by González et al. (2020), who recorded that Trichoderma reesei was not inhibited at 100 ppm.

In this study, Propiconazole inhibited the mycelial growth of the Trichoderma strains by 100% at a concentration of 100 ppm. By contrast, Zapata et al. (2023) found that, five days after the beginning of the study, the same fungicide at 1.25 mL L-1 inhibited the mycelial growth of T. koningiopsis by 31% (Tri-cotec® WG in Colombia). These authors recorded that Fluazinam inhibited by 39.6% at the dose of 1 mL L-1, which contrasts with the results of this study, since the mycelial growth inhibition of the four Trichoderma species varied between 88.9 and 98.5%. They also recorded that Prochloraz and Thiabendazole completely inhibited the mycelial growth, which also coincides with our results.

The difference in the sensitivity of S. rolfsii isolates and Trichoderma species to the different fungicides evaluated in this study, compared to other research studies, could be due to the constant use of fungicides in various crops. The exposure of this fungus to these products varies according to the agronomic management of the plant species, and over time, the fungus adapts to high doses of synthetic fungicides for disease management (Pérez-Moreno et al., 2009; Chaparro et al., 2011).

The results of this study open new lines of research related to studies of the effectiveness of fungicides at greenhouse and field levels. In this sense, the effectiveness of the molecules that were efficient in the in vitro inhibition of S. rolfsii must be determined. The most adequate phenological stage of the crop should also be evaluated, along with the concentration and the number of applications for the management of S. rolfsii, which causes the soft potato tuber rot, in the field.

The combination of the Trichoderma species with the fungicides Propineb and Thifluzamide and the in vitro effect of these against S. rolfsii is an option for the producer in the control of soft potato tuber rot. This approach has been practiced for the control of this disease in the potato crop (Rubayet and Bhuiyan, 2016). Future projects should lean towards the reduction in the concentration of fungicides when mixed with antagonistic Trichoderma species, with the aim of reducing environmental contamination, but particularly the contamination of tubers.

 Conclusions

The results indicate that Thifluzamide (0.01 ppm) more efficiently inhibited the mycelial growth of S. rolfsii (32.7%) as compared to Propineb (12.2%). Both fungicides reduced sclerotia production by the pathogen (157-164 sclerotia/Petri dish), while the mean production of these resistance structures was 182 sclerotia per Petri dishes without fungicides. In Trichoderma spp., Propineb (100 ppm) only affected T. asperelloides (54.9% mycelial growth inhibition), whereas Thifluzamide showed variable effects (0- 63%), confirming its compatibility with Trichoderma species. These findings suggest that: 1) Thifluzamide is more effective against S. rolfsii but requires combination with other strategies to reduce sclerotia formation; 2) Both fungicides can be integrated with Trichoderma spp. in integrated management programs, as they show low toxicity toward Trichoderma spp.; 3) Fungicide selectivity varies according to Trichoderma isolate, highlighting the need for specific evaluations. It is recommended to optimize doses and formulations to improve S. rolfsii control without compromising biocontrol agents, prioritizing schemes that combine both approaches for sustainable management