El café (Coffea arabica) es un cultivo de gran importancia en México, tanto en términos económicos como sociales. Es fuente de empleo para miles de familias, especialmente en los estados del sur y centro del país (Barrera Rodríguez et al., 2021). Dentro de este panorama, Chiapas, México destaca como el mayor productor, con 34.9 % en superficie plantada seguido, por Veracruz y Oaxaca (SIAP, 2023). Sin embargo, este cultivo enfrenta numerosos problemas fitosanitarios como enfermedades e insectos plagas, que influyen en su rendimiento y calidad (Medina-Melendez et al., 2016). Aunado a esto, en Chiapas se carece de evidencia científica en el diagnóstico de fitopatógenos asociados a plántulas de café, información clave para el manejo integrado de enfermedades en este cultivo. En este contexto, el objetivo del presente estudio fue identificar morfológica y molecularmente nuevos agentes causales asociados al Damping off en plántulas de café.

Colecta en semilleros. En junio de 2023 se colectaron 20 semillas y 10 plántulas de café con síntomas de Damping off (Figura 1A-F) en cada uno de los ocho semilleros pertenecientes a las fincas cafetaleras de los municipios de Villa Corzo y Ángel Albino Corzo, Chiapas (Cuadro 1).

Cuadro 1

Municipio	Nombre de la finca	Variedades de café	Coordenadas geográficas
Villa Corzo	San Martha	Marago, Pacamara	15° 57' 51.7"N - 93° 22' 21.1" W
Villa Corzo	Gracias a Dios	Bourbón, Marsellesa	15° 58' 35.9 "N - 93° 21' 49.0" W
Ángel Albino Corzo	Solo Dios	Cerezo amarillo	15° 37' 55.0" N - 92° 33' 44.2" W
Villa Corzo	San Luis	Typica	16° 06' 14" N - 93° 35' 06" W
Villa Corzo	Ejido Sierra Morena	Costa Rica, Sarchimor	16° 09' 25.1" N - 93° 36' 08.0" W

Figura 1

Aislamiento de hongos. Las plántulas y semillas con síntomas de Damping off se trasladaron al Laboratorio de Biofertilizantes y Bioinsecticidas de la Universidad de Ciencias y Artes de Chiapas (UNICACH), sede Villa Corzo, Chiapas, México, para su diagnóstico. Las plántulas se lavaron con agua de la llave, se segmentaron en raíz, tallo y hoja con un bisturí en explantes de 5 mm de tejido enfermo, igualmente que las semillas. Posteriormente, todos los explantes (semillas y tejido vegetal) se desinfectaron con hipoclorito de sodio al 10 %, seguido de dos lavados con agua destilada estéril. Se colocaron cinco explantes por caja Petri con medio de papa dextrosa agar (PDA) y cultivo nutritivo (V8) por triplicado e incubaron en una cámara de crecimiento vegetal con un fotoperiodo de 12 h luz, 12 h de oscuridad a 28 °C (Ríos-Velasco et al., 2016). El crecimiento micelial se monitoreo cada 24 horas durante siete días, posteriormente los hongos aislados se purificaron por punta de hifa.

Identificación morfológica y molecular. Los hongos aislados se identificaron morfológicamente utilizando la técnica de tinción, descrita por Sinclair y Dhingra, (2017) y claves taxonómicas (Barnett y Hunter, 1998; Watanabe, 2002), observadas en un microscopio óptico (Axiolab 5, Carl Zeiss). Para la identificación molecular, se extrajo el ADN genómico utilizando el protocolo descrito por Raeder y Broda (1985) y se realizó la amplificación por PCR y secuenciación del espaciador del gen transcrito interno (ITS) del rDNA utilizando los oligos ITS4/ITS1 (White et al., 1990). Los productos de PCR fueron secuenciados en el Laboratorio de Servicios Genómicos del CINVESTAV-Irapuato y comparados con la base de datos del Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) mediante BLAST (Altschul et al., 1990) y registrados en el GenBank.

Prueba de patogenicidad. Los postulados de Koch se llevaron a cabo bajo condiciones de campo, en un ambiente semicontrolado con malla sombra al 75 %, simulando el sistema agroforestal del cultivo de café donde se regula la radiación solar excesiva. Con 20 semillas de cada variedad de café (Typica, Marago, Bourbón, Marsellesa, Costa Rica, Sarchimor, Cerezo amarillo, Pacamara) fueron desinfectadas con hipoclorito de sodio al 10 % y sembradas en vasos de unicel de 14 fl oz utilizando como sustrato arena estéril. Se inoculó el sustrato con 1000 µL de una suspensión de conidios de Fomitopsis meliae (4x10⁴ esporas mL^-1). Las inoculaciones se repitieron cada 15 días hasta la emergencia de las plántulas (59 días), con un total de cinco inoculaciones. Las semillas control fueron regadas con agua destilada estéril. Las plántulas fueron monitoreadas hasta la observación de síntomas.

Con base a las características morfológicas y moleculares, se identificaron cuatro hongos asociados al Damping off en semillero de café; dos pertenecen al género Fusarium:

F. oxysporum (PX216556) y F. solani (PV242014), con una frecuencia del 100 %, presentando macroconidias en forma de medias lunas, especies fitopatógenos asociados a enfermedades de raíz en cafeto (López-Lima et al., 2020; Gamboa-Becerra et al., 2021). Otro hongo asociado a la enfermedad fue Phoma costarricensis (PX244525) con una frecuencia del 33 %, con presencia de picnidios hialinos y clamidosporas solitarias. Así mismo, se reporta por primera vez la presencia de Fomitopsis meliae (PV242016) como agente causal del Damping off en café con una frecuencia del 100 %, especie que mostró cistidiolos hialinos con pared delgada terminados en punta con dimensiones de 3.912 x

1.377 µm (largo x ancho) (n=30) (Figura 2) (Han y Cui, 2014; Salazar-Vidal, 2016; Li, et al., 2013; Han and Cui, 2014; Alcantara-Varga et al., 2020). Molecularmente el aislado presentó el 97.23 % de similitud con Fomitopsis meliae.

Figura 2

Pruebas de patogenicidad. El 100 % de las plantas inoculadas con Fomitopsis meliae iniciaron los síntomas a los 45 días después de la emergencia; amarillamiento de las hojas, cambio de coloración de la base del tallo de verde a marrón y posteriormente las lesiones se extendieron en gran parte, hasta provocar pudrición de la raíz, tallo y muerte de plántulas, similares a los observados en las plántulas de los semilleros muestreados. El control no presentó ninguna sintomatología. Las plántulas con síntomas se utilizaron para reaislar el hongo y se corroboró que F. meliae es un agente causal del complejo Damping off en plántulas de café, confirmando su patogenicidad en todas las variedades de café evaluadas (Typica, Marago, Bourbón, Marsellesa, Costa Rica, Sarchimor, Cerezo amarillo, Pacamara) (Figura 3 A-D).

Figura 3

En México, existen evidencias documentadas que F. meliae es el agente causal de la muerte regresiva de los cítricos (Polanco-Florián et al., 2020) y la pudrición marrón de la madera en árboles de limoneros vivos en Arizona y California (Hu y Wright, 2021). Asimismo, se ha aislado este patógeno de frutos y hojas de café arábico con síntomas de antracnosis (Sosa-Rubio, 2023), donde esta enfermedad es provocada por el complejo de Colletotrichum gloeosporioides y no hay evidencias científicas de pruebas de patogenicidad de Fomitopsis meliae provocando enfermedades en plantas de café.

Los resultados obtenidos en este estudio coinciden con lo descrito por López-Lima et al. (2020) y Gamboa-Becerra et al. (2021), quienes reportaron la presencia de diversas especies de Fusarium (F. oxysporum y F. solani) asociados a enfermedades radiculares del cafeto. Por otro lado, también se identificó la presencia de Phoma costarricensis según SENASICA (2014), provocando la enfermedad “quema o derrite del cafeto”, afectando principalmente órganos jóvenes como hojas, tallos, flores y frutos, lo cual concuerda con las observaciones realizadas en este estudio.

Si bien solo se realizó pruebas de patogenicidad con Fomitopsis meliae, se reconoce la importancia de evaluar experimentalmente el potencial patogénico del resto de los hongos aislados, por lo que, se continuarán futuras investigaciones para realizar pruebas de patogenicidad y estrategias de control biológico con un enfoque de manejo integrado de enfermedades del cafeto.

Se identificaron cuatro especies de hongos asociados al Damping off: F. oxysporum, F. solani, Phoma costarricensis y el primer reporte de Fomitopsis meliae causando síntomas característicos de Damping off en semilleros de café, tanto en variedades locales, como en variedades introducidas resistentes a la roya del café (Hemileia vastatrix) en Chiapas, México. Ante esto, aumenta el número de agentes causales de esta enfermedad en etapas tempranas de desarrollo de las plántulas de café en los semilleros.