El cultivo de chile (Capsicum spp.) se encuentra entre los más importantes a nivel mundial; en México, en 2024 la producción alcanzó 3.2 millones de toneladas de chile verde y el país se ubicó en el cuarto lugar de producción mundial, además de contar con el segundo valor de producción más alto a nivel nacional (FAO, 2023; SIAP, 2024). La pudrición de raíz causada por el oomiceto Phytophthora capsici constituye el principal factor limitante en la producción de chile y provoca severas pérdidas económicas (Silva-Rojas et al., 2009). Su presencia ha reducido la superficie cultivada en regiones importantes y ha desplazado cultivos susceptibles. Este patógeno causa marchitez de plantas, tizón foliar y pudrición de raíces, tallos y frutos. Los métodos de control de P. capsici se basan en prácticas de manejo integrado, que incluyen prácticas culturales, aplicaciones de fungicidas y el cultivo de variedades resistentes. Sin embargo, el uso de fungicidas continúa como estrategia predominante, lo que genera importantes preocupaciones ambientales y para la salud humana, además de contribuir al desarrollo de resistencia del patógeno a los fungicidas (Hausbeck y Lamour, 2004; Sánchez-Gurrola et al., 2019). En conjunto, el alto impacto de la enfermedad en la producción de chile y las limitaciones y riesgos asociados con las prácticas actuales de control resaltan la necesidad de estrategias de manejo alternativas y más sostenibles.

México es el centro de origen y domesticación de Capsicum annuum, la especie económicamente más importante de las cinco especies domesticadas del género Capsicum (C. annuum, C. chinense, C. frutescens, C. baccatum y C. pubescens). Se cultiva una amplia diversidad de chiles; por ello, el país alberga una elevada diversidad genética de P. capsici, asociada con su alta tasa de coevolución hospedero-patógeno, su rápida dispersión y su capacidad de adaptación a nuevos hospedantes y ambientes. Estos factores confieren a este patógeno una gran importancia económica y lo convierten en una amenaza potencial para la seguridad alimentaria mundial (Retes-Manjarrez et al., 2020; Reyes-Tena et al., 2020; Sánchez-Gurrola et al., 2019). Los esporangios y las zoosporas de P. capsici presentan un alto potencial reproductivo bajo condiciones de humedad, lo que facilita su rápida diseminación a través del agua, la penetración en raíces, así como ciclos sucesivos de infección dentro de una misma temporada de cultivo (Granke et al., 2012). Por lo tanto, es fundamental explorar enfoques alternativos como el control biológico para el control del tizón y la pudrición radicular causados por Phytophthora.

Diversos géneros bacterianos se han evaluado in vitro e in vivo como antagonistas de P. capsici, y han demostrado un potencial prometedor (Akgül y Mirik, 2008; Lee et al., 2008; Ley-López et al., 2018; Xu et al., 2020). Sin embargo, debido a la alta agresividad de este patógeno y a la variabilidad en los resultados reportados, es importante continuar con la búsqueda de nuevos antagonistas y profundizar en la evaluación de sus interacciones (Lee et al., 2013; Xu y Kim, 2016).

El género Bacillus comprende bacterias ubicuas que habitan en diversos ambientes, incluidos el suelo, agua, aire, la rizósfera y muchos ambientes extremos. Este género se encuentra entre los grupos bacterianos más utilizados para el control biológico de hongos fitopatógenos y oomicetos, como P. capsici, principalmente debido a su capacidad para producir una amplia variedad de metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana y propiedades promotoras del crecimiento vegetal (Ferreira et al., 1991; Fira et al., 2018; Zhang et al., 2010).

Descrita por primera vez en 2016 tras su aislamiento a partir de agua de una granja de camarones en Zhangzhou, China (Ruginescu et al., 2018), Bacillus zhangzhouensis ha atraído creciente atención en los últimos años como una bacteria promotora del crecimiento vegetal con características halófitas (Alp et al., 2024; Bezerra et al., 2022; Emami et al., 2019). En relación a características relacionadas con el control biológico, diversos estudios han reportado el potencial antimicrobiano de cepas de B. zhangzhouensis frente a patógenos de animales, humanos y plantas, lo que resalta su actividad antagonista de amplio espectro (Anil et al., 2019; Aytenov et al., 2024; Molina-Garza et al., 2021; Soliman et al., 2022). Sin embargo, hasta la fecha no existen estudios que hayan evaluado el desempeño biocontrol de Bacillus zhangzhouensis frente a aislados mexicanos de P. capsici, ni su eficacia en plantas de chile, lo cual resulta particularmente relevante dada la alta variabilidad de este patógeno. El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad de biocontrol de un aislado bacteriano como agente de control biológico frente a seis aislados de P. capsici y uno de P. cinnamomi. Los efectos de biocontrol se evaluaron con base en el desarrollo de micelio, la formación de esporangios y la liberación de zoosporas, observaciones mediante microscopía óptica y electrónica de barrido, así como la severidad de la pudrición de raíz causada por Phytophthora en plantas de chile.

Condiciones de cultivo microbiano. El aislado bacteriano JJR198 fue proporcionado por el Laboratorio de Biorremediación de la Universidad Autónoma de Aguascalientes. Este se cultivó mediante estriado en placa con agar LB y se incubó durante 24-48 h a 30 °C. Una colonia individual se transfirió a caldo LB y se incubó a 30 °C durante 24 h en un agitador orbital a 160 rpm. Después de la incubación, la suspensión bacteriana se ajustó con agua destilada estéril (ADE) a concentraciones finales de 1.0 × 10⁴, 1.0 × 10⁶ y 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹ para las evaluaciones posteriores; la concentración más alta correspondió a una densidad óptica de 0.1 a 600 nm (Kim et al., 2009; Xu et al., 2020).

Seis aislados de Phytophthora capsici (Pc1, Pc2aIT, Pc43M, PcAR-2, Pc57 y PcAR-14) y un aislado de P. cinnamomi (Pcn5-1) fueron amablemente proporcionados por el Laboratorio de Fitopatología del Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales, Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Se contó con información sobre el hospedante, tipo de apareamiento y origen geográfico para los aislados de P. capsici Pc2aIT, Pc43M, PcAR-2, Pc57, PcAR-14 y para Pcn5-1. En particular, PcAR-2 se aisló de chile poblano, tipo de apareamiento (TA) A1, en Copándaro de Galeana, Michoacán, México; PcAR-14 de chile serrano (TA A1) en Cuitzillo el Grande, Tarímbaro, Michoacán, México; Pc57 de chile (TA A2) en Guanajuato, México; Pc43M de chile en Guanajuato, México; y Pc2aIT de chile poblano (TA A2) en Yurécuaro, Michoacán, México. Pcn5-1 se aisló de aguacate en Michoacán, México. Todos los aislados se cultivaron en PDA, y discos de agar con micelio de siete días de crecimiento se transfirieron a tubos de 15 mL con agua destilada estéril (ADE) y se almacenaron a 4 °C hasta su uso.

Identificación del aislado bacteriano. Se realizaron pruebas fenotípicas, que incluyeron morfología celular, tinción de Gram y ensayos de catalasa y oxidasa. El aislado bacteriano se identificó mediante la secuenciación del gen 16S rRNA, realizado por el Laboratorio de Servicios Genómicos del CINVESTAV (Irapuato, México). El aislado axénico fue enviado y el servicio incluyó la extracción de ADN y la amplificación por PCR del gen 16S rRNA mediante el uso de cebadores universales, de acuerdo con el protocolo estándar del proveedor. La longitud exacta del fragmento amplificado y las secuencias de los cebadores no fueron especificadas por el proveedor del servicio. La secuenciación se llevó a cabo mediante el método didesoxi de Sanger (Sanger et al., 1977). Las secuencias homólogas de las regiones amplificadas se buscaron mediante la herramienta Basic Local Alignment Search Tool (BLASTn) en la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI). El alineamiento múltiple de secuencias se realizó con la herramienta MUSCLE. El análisis filogenético se efectuó con el programa MEGA 11 (Molecular Evolutionary Genetics Analysis versión 11), mediante el método de distancia promedio con 1 000 repeticiones bootstrap (Tamura et al., 2021).

Inhibición del desarrollo de micelio. El efecto inhibitorio de JJR198 se evaluó mediante el método de cultivo dual (Chávez-Díaz et al., 2016). En este ensayo se incluyeron seis de los aislados de Phytophthora descritos anteriormente, los cuales se cultivaron en PDA a 25 °C durante cuatro días. Se extrajeron discos de micelio (8 mm de diámetro) de cada aislado y se colocaron en el centro de placas con PDA. Con un hisopo estéril se inoculó la suspensión bacteriana (1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹) en cuatro puntos equidistantes, a 2.7 cm del centro hacia el margen externo, de modo que se formó un área cuadrada sin inocular alrededor del disco micelial. Placas de cada aislado sin inoculación bacteriana se utilizaron como controles. Después de cinco días de incubación a 25 °C, se midió el diámetro de crecimiento de micelio y se calculó el porcentaje de inhibición en relación al control. El experimento siguió un diseño completamente al azar con dos tratamientos (con y sin inoculación bacteriana), seis repeticiones por aislado de Phytophthora y cada caja Petri como unidad experimental.

Efecto de la concentración bacteriana sobre la formación de esporangios. Para evaluar el efecto inhibitorio del aislado bacteriano sobre la formación de esporangios, se seleccionaron dos aislados de P. capsici, PcAR-2 y Pc57, por su alta y estable producción de esporangios, y se cultivaron en agar jugo V8 (200 mL L⁻¹ de jugo V8, 800 mL L⁻¹ de agua destilada, 3 g L⁻¹ de CaCO₃, 15 g L⁻¹ de agar, pH 7.2) a 25 °C durante cuatro días. Se colocaron tres discos de micelio (8 mm de diámetro) por caja de Petri de 80 mm × 10 mm y se inundaron con 25 mL de suspensiones bacterianas a tres concentraciones (1.0 × 10⁴, 1.0 × 10⁶ y 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹). Las placas se incubaron a 25 °C durante 48 horas para inducir la formación de esporangios. Cajas Petri solo con agua destilada estéril (ADE) se utilizaron como control. Los esporangios formados en los discos de micelio se observaron in situ para cada concentración al colocar las cajas Petri en un microscopio óptico Zeiss Primo Star con objetivo 4×; en cada disco se contabilizaron los esporangios dentro de áreas de observación de 2 mm² con el software ImageJ. El experimento se realizó con cuatro repeticiones (cajas Petri) por tratamiento de concentración.

Microscopía electrónica de barrido. Discos de micelio de PcAR-2 con esporangios, sin y con tratamiento de JJR198 (1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹), se fijaron por inmersión en glutaraldehído al 2.5 % (v/v) y se lavaron varias veces con PBS 1X. Las muestras se deshidrataron mediante una serie gradual de etanol (60, 70, 80, 90, 96 y 100 %) durante 20 minutos en cada concentración. Después de la deshidratación en etanol al 100 %, las muestras se secaron al punto crítico con un equipo Samdri (Tousimis Research Corporation), se montaron en soportes porta muestras, se recubrieron con oro durante 3 minutos con el equipo Denton Vacuum Desk II y se examinaron con un microscopio electrónico de barrido JEOL JSM-5900LV (Hayat, 1981, 1989; JEOL, 2000).

Efecto de las concentraciones de la bacteria sobre la liberación de zoosporas. Para evaluar el efecto de JJR198 sobre la liberación de zoosporas, en el centro de cajas Petri (80 mm × 10 mm) se colocaron tres discos de agar V8 (8 mm de diámetro) con micelio del aislado Pc57 (el de mayor producción de esporangios) con cuatro días de desarrollo. Los discos con micelio se inundaron con 25 mL de ADE y se incubaron durante 48 h a 25 °C para inducir la formación de esporangios. Posteriormente, el agua se retiró con una pipeta y se reemplazó con 25 mL de suspensiones bacterianas en tres concentraciones (1.0 × 10⁴, 1.0 × 10⁶ y 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹). Para inducir la liberación de zoosporas, las cajas de Petri se incubaron a 10 °C durante 30 minutos, seguidos de 30 minutos a 25 °C. Después de la incubación, el número de zoosporas por mL se estimó para cada caja Petri con un hemocitómetro. Cada tratamiento de concentración se replicó cuatro veces, y se usó ADE como control.

Evaluación de la supresión de la enfermedad en plantas de chile en maceta. Plántulas de chile Guajillo (susceptible a la enfermedad) fueron producidas en un invernadero comercial libre de plagas y enfermedades. Después de ocho semanas, las plántulas individuales se trasplantaron a charolas de plástico con cavidades de seis celdas de 195 cm³ cada una. Las cavidades fueron previamente llenadas con sustrato Berger BM2 esterilizado (70-80 % turba, perlita, vermiculita y agente humectante) y se suplementaron con 13 perlas de fertilizante de liberación controlada (Osmocote 14-14-14). Todas las plántulas se mantuvieron en invernadero durante dos semanas a temperaturas de 11 a 30 °C; el riego se proporcionó cada dos días o según fuera necesario. Para evaluar el efecto protector del aislado bacteriano JJR198 contra P. capsici, las plantas fueron preinoculadas con JJR198 a los 7, 3 o 0 días antes de la inoculación con el oomiceto.

Todos los tratamientos bacterianos se realizaron mediante la aplicación de 5 mL de suspensiones (1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹) al sustrato en la base de la planta, sobre las raíces. Como controles se utilizaron plantas libres de bacteria y de P. capsici, plantas infectadas únicamente con el oomiceto y plantas tratadas únicamente con la bacteria. Cada uno de los cuatro tratamientos consistió en seis plantas y tuvo dos repeticiones. Antes de la inoculación del aislado AR-14 de P. capsici, todas las charolas se colocaron en bandejas con agua para asegurar la saturación de las raíces. Se preparó una suspensión de zoosporas, ajustada como se describió anteriormente para las inoculaciones de P. capsici. Las plantas inoculadas con el patógeno recibieron 10 000 zoosporas por celda. Todas las charolas permanecieron bajo condiciones de inundación durante 48 horas; después se eliminó el exceso de agua. La severidad de la pudrición radicular de cada planta se evaluó con base en las partes aéreas a los 7 y 14 días después de la inoculación (DDI) con P. capsici, mediante una escala de severidad modificada (0 a 5) basada en Ristaino (1990), donde: 0

= sin síntomas visibles; 1 = ligero marchitamiento foliar con lesiones iniciales de color marrón el tallo; 2 = 30-50 % de la planta con síntomas; 3 = 50-70 % de la planta afectada; 4 = 70-90 % de la planta afectada; 5 = planta muerta.

Ensayo de tolerancia a la sal. Después de la identificación molecular del aislado bacteriano y con base en las características fisiológicas reportadas previamente en la literatura para especies filogenéticamente relacionadas, se evaluó su resistencia a la sal mediante la determinación del crecimiento en medio agar nutritivo (AN) con concentraciones crecientes de NaCl (5, 7.5, 10 y 15 %). Placas sin NaCl se utilizaron como control. Todos los ensayos se realizaron por triplicado, y las placas se incubaron a 30 °C durante 48-72 h antes de medir el crecimiento de las colonias bacterianas.

Presencia del inóculo bacteriano en raíces de chile. El aislado bacteriano JJR198 se recuperó del rizoplano y la rizósfera de plantas de chile después de dos semanas de su inoculación, mediante la técnica de dilución en placa (Shankar et al., 2011; Shahid et al., 2012). Muestras de cepellones de plantas inoculadas con la bacteria se agitaron para retirar el exceso de sustrato. Para la población bacteriana de la rizósfera, un gramo de sustrato adherido se suspendió en 9 mL de ADE en tubos de vidrio de 25 mL. Para la población bacteriana del rizoplano, las raíces se enjuagaron diez veces con ADE; posteriormente, un gramo de estas raíces se agitó vigorosamente con perlas de vidrio en 9 mL de ADE en tubos de vidrio de 25 mL, con el fin de desprender las bacterias adheridas a la raíz. Todos los tubos se calentaron en baño maría a 80 °C durante 15 minutos para eliminar células vegetativas. Se prepararon diluciones seriadas decimales hasta 1.0 × 10⁴, y se sembraron

0.1 mL de cada dilución en placas con agar nutritivo (AN) suplementado con 6 % de NaCl. Se cuantificaron las unidades formadoras de colonias (UFC) y se realizó tinción de Gram después de 48 horas de incubación a 30 °C. Las plantas no inoculadas se utilizaron como control. Este ensayo incluyó tres repeticiones.

Análisis estadístico. Los datos de cada experimento se organizaron en una base de datos específica y se analizaron con el software STATISTICA 8.0 (StatSoft Inc., EE. UU.). Para cada experimento, los análisis estadísticos incluyeron un análisis de varianza (ANOVA), seguido de la comparación de medias mediante la prueba de Tukey con un nivel de significancia de p ≤ 0.05. También se evaluaron los supuestos de normalidad y homogeneidad de varianzas.

Identificación del aislado bacteriano. La cepa JJR198 fue Gram positiva, con forma de bacilo, y presentó actividad catalasa y oxidasa positiva. La secuencia de JJR198 tuvo una longitud de 1 513 nt. La búsqueda de genes homólogos en NCBI mostró 99.6 % de similitud con Bacillus zhangzhouensis cepa MCCC 1A08372 y Bacillus pumilus. El árbol filogenético mostró que JJR198 se ubica en el mismo clado junto con B. zhangzhouensis y

B. pumilus (Figura 1). La secuencia del gen 16S rRNA se depositó en GenBank bajo el número de accesión PV826766.

Inhibición del desarrollo de micelio. La cepa bacteriana JJR198 (1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹) mostró una actividad inhibitoria similar sobre el crecimiento micelial de los cinco aislados de P. capsici y un aislado de P. cinnamomi (Figuras 2 y 3). Los porcentajes de inhibición oscilaron entre 42.0 y 52.7 %. La mayor inhibición se observó en el aislado PcAR-2 (52.7 %), que presentó diferencia significativa con respecto a Pc43M (42.1 %). Pc2aIT (51.6 %) también mostró mayor inhibición que Pc43M, mientras que Pc1 (42.0 %), Pc57 (47.0 %) y Pcn5-1 (46.6 %) presentaron valores intermedios sin diferencias significativas entre ellos (Tukey, p ≤ 0.05).

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Efecto de la concentración bacteriana sobre la formación de esporangios. Bajo las condiciones de inducción de esporangios (48 h a 25 °C), la cepa bacteriana JJR198 no mostró un efecto antagonista significativo contra los aislados de P. capsici PcAR-2 y Pc57 a concentraciones bajas y medias (1.0 × 10⁴ y 1.0 × 10⁶ UFC mL⁻¹). Sin embargo, la formación de esporangios fue completamente inhibida a 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹ (Cuadro 1). En el inóculo bacteriano más alto, la morfología de los aislados de P. capsici pareció alterada, lo que sugiere modificaciones en el micelio y las hifas, junto con la presencia de agregados bacterianos sobre estas (Figura 4).

Efecto de las concentraciones de la bacteria sobre la liberación de zoosporas. La liberación de zoosporas a partir de esporangios de Pc57 no fue inhibida por las suspensiones de la cepa JJR198 a 1.0 × 10⁴ ni 1.0 × 10⁶ UFC mL⁻¹ en comparación con el control (p > 0.05). Sin embargo, se observó una reducción significativa a una concentración de 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹, con liberación de esporas prácticamente nula (Cuadro 1).

Figura 4

Cuadro 1

Densidad de inóculo de JJR198 (UFC mL-1)	No. de esporangios/AVz		No. de zoosporas (1.0 × 103 mL-1)
	PcAR-2	Pc57	Pc57
ADE¤ (control)	60.1 ± 6.2 a	234.2 ± 12.7 a	25.9 ± 4.9 a
1.0 × 104	41.0 ± 4.9 a	207.2 ± 15.3 a	26.1 ± 2.6 a
1.0 × 106	50.1 ± 10.7 a	205.5 ± 31.4 a	20.6 ± 3.3 a
1.0 × 108	0.0 ± 0.0 b	0.0 ± 0.0 b	0.2 ± 0.1 b

^z

AV, área de visualización de 2 mm² bajo microscopio óptico. ^¤ADE, agua destilada estéril. Los resultados se expresan como medias ± errores estándar de cuatro repeticiones. Las mismas letras en cada columna indican que no hay diferencias significativas (Tukey, p ≤ 0.05).

Evaluación de la supresión de la enfermedad en plantas de chile en maceta. El aislado bacteriano JJR198 no redujo significativamente la severidad de la pudrición radicular en las plantas tratadas, independientemente de si la aplicación bacteriana se realizó 7, 3 o 0 días antes de la inoculación con P. capsici. La severidad de la pudrición radicular aumentó gradualmente con los DDI en los cuatro tratamientos. No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos bacterianos y el control sin inocular (Figura 5).

Figura 5

Ensayo de tolerancia a la sal. JJR198 fue evaluada por su capacidad de desarrollarse en altas concentraciones de NaCl. JJR198 logró crecer en medio AN después de 48 horas de incubación a 30 °C con 7.5 % de NaCl.

Presencia del inóculo bacteriano en raíces de chile. En muestras de rizósfera y rizoplano de raíces de chile, dos semanas después de la inoculación, se observaron colonias bacterianas con las mismas características macro y micro morfológicas que el aislado JJR198, con colonias irregulares de tamaño mediano, textura irregular, coloración crema y bacilos Gram positivos. No se observó crecimiento de otras colonias en medio AN suplementado con 6 % de NaCl. El conteo bacteriano fue de 1.6 × 10⁶ UFC mL⁻¹ en muestras de rizósfera y de 0.19 × 10⁶ UFC mL⁻¹ en muestras de rizoplano.

En estudios previos, Liu et al. (2016) aislaron una cepa de una granja de cultivo de camarón en la ciudad de Zhangzhou, China, y la denominaron DW5-4. La identificación molecular de DW5-4 se realizó utilizando los genes 16S y gyr, y la búsqueda de genes homólogos mostró identidad con Bacillus pumilus. Sin embargo, un análisis bioinformático detallado demostró que se trataba de una cepa diferente, la cual fue nombrada Bacillus zhangzhouensis. Así, JJR198 presenta una similitud muy alta con ambas cepas, como se demostró en el árbol filogenético. La identificación molecular de JJR198 mediante 16S es consistente con otras cepas de B. zhangzhouensis y con su estrecha similitud con B. pumilus (Anil et al., 2019; Liu et al., 2016; Soliman et al., 2022).

La cepa JJR198 mostró actividad antagonista in vitro contra el desarrollo de micelio de cinco aislados de P. capsici y un aislado de P. cinnamomi. Aunque JJR198 alcanzó una inhibición máxima de micelio del 52.7 %, presentó un efecto comparable entre todos los aislados de Phytophthora, lo que sugiere un potencial relevante de protección de amplio espectro. Esto es particularmente importante considerando las diferencias biológicas en tasa de crecimiento, producción de esporangios y patogenicidad entre los aislados de P. capsici (Li et al., 2007). Un efecto similar de B. zhangzhouensis sobre el desarrollo de micelio fue reportado por Anil et al. (2019), con una inhibición del 62 % de la mancha foliar de la morera (Morus spp.). De igual manera, Aytenov et al. (2024) encontraron que 47 cepas de B. zhangzhouensis, obtenidas de la rizósfera y la filósfera de plantas en un ambiente hipersalino, mostraron inhibición de amplio espectro en el desarrollo de micelio frente a 13 hongos fitopatógenos.

En la evaluación frente a esporangios y zoosporas de P. capsici, JJR198 restringió por completo la formación de esporangios y detuvo la liberación de zoosporas a una concentración bacteriana de 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹, pero no mostró efecto sobre ninguno de los dos a 1.0 × 10⁴ y 1.0 × 10⁶ UFC mL⁻¹. Resultados similares fueron descritos por Kim et al. (2009) y Kim et al. (2010), quienes estudiaron diversas cepas de Paenibacillus polymyxa, con poco o ningún efecto sobre la formación de esporangios y la liberación de zoosporas a bajas concentraciones del inóculo bacteriano, pero una completa inhibición a

1.0 × 10⁷ y 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹, donde niveles más altos de inóculo también alteraron la morfología de los esporangios.

Soliman et al. (2022) determinaron mediante análisis espectrométrico de masas que el fenol, 2,4-bis(1,1-dimetiletil), es el compuesto bioactivo responsable de la actividad antimicrobiana de B. zhangzhouensis. Además, lo evaluaron como un agente de control biológico de amplio espectro con alta actividad contra distintos patógenos, incluidos hongos y bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Este compuesto se ha reportado previamente por sus propiedades antioomiceto contra P. capsici y P. cinnamomi (Rangel-Sánchez et al., 2014; Romero-Correa et al., 2014; Sang et al., 2011; Sang y Kim, 2012).

Las evaluaciones in vivo de JJR198 comprendieron dos enfoques complementarios. En primer lugar, la bacteria se reaisló con éxito del rizoplano y la rizósfera de plantas de chile inoculadas, lo que confirmó su capacidad para persistir en el ambiente radicular. En segundo lugar, y de manera crítica, se evaluó su desempeño antagonista frente a P. capsici en plantas de chile en maceta, donde no se observó reducción en la severidad de la enfermedad. Esta ausencia de supresión de la enfermedad, a pesar de la colonización efectiva de la raíz, subraya una limitación importante en el desempeño in planta de JJR198 y pone de manifiesto la discrepancia entre la colonización radicular, los rasgos antagonistas in vitro y el control efectivo de la enfermedad. Aunque otros aislados de B. zhangzhouensis se han reportado como bacterias asociadas a la rizósfera o endófitas con características prometedoras de promoción de desarrollo vegetal y biocontrol en estudios en maceta y en campo (Bhutani et al., 2021; Carreiras et al., 2023; Karagoz et al., 2018; Maheshwari et al., 2022).

La cepa JJR198 toleró hasta 7.5 % de NaCl. Diversos estudios han descrito cepas de

B. zhangzhouensis como bacterias halotolerantes con potencial prometedor en la agricultura debido a sus propiedades antagonistas y promotoras de desarrollo vegetal en suelos salinos (Aytenov et al., 2024). Esto resulta particularmente relevante, dado que la salinización del suelo constituye un problema importante y cada vez más frecuente en los sistemas agrícolas (Kramer y Mau, 2023). Aislada principalmente de muestras marinas, lagos costeros hipersalinos y de la rizósfera y filósfera de plantas en ambientes salinos, esta especie también ha mostrado actividades enzimáticas significativas, entre ellas actividad celulolítica, proteasa y queratinasa (Moridshahi et al., 2020; Niu-Niu et al., 2023; Ruginescu et al., 2018). Entre estas, las proteasas se consideran unas de las principales enzimas involucradas en la degradación de las paredes celulares de patógenos fúngicos y oomicetos (Latijnhouwers et al., 2003; Carmona-Hernández et al., 2019).

Los resultados de este estudio demuestran que, bajo condiciones in vitro,

B. zhangzhouensis JJR198 presenta potencial como agente biocontrol contra P. capsici debido a sus efectos inhibitorios sobre el desarrollo de micelio, la formación de esporangios y la liberación de zoosporas. No obstante, dado que no mostró actividad antagonista contra la pudrición radicular causada por Phytophthora en plantas de chile bajo condiciones de invernadero, en estudios futuros deberán abordarse los factores que limitan su desempeño in planta, incluidos las condiciones ambientales, la dinámica de la rizósfera y las respuestas mediadas por el hospedero. A pesar de ello, su actividad in vitro sugiere que esta cepa podría explorarse adicionalmente como fuente de compuestos bioactivos con actividad antimicrobiana.

Este estudio demostró que Bacillus zhangzhouensis JJR198 presentó actividad antagonista in vitro contra varios aislados de Phytophthora capsici. El aislado bacteriano JJR198 inhibió el crecimiento micelial entre 42.0 y 52.7 % en cinco aislados de P. capsici y un aislado de P. cinnamomi. La respuesta biocontrol dependió en gran medida de la concentración bacteriana inicial, ya que la formación de esporangios y la liberación de zoosporas se suprimieron completamente a 1.0 × 10⁸ UFC mL⁻¹, mientras que no se detectó efecto inhibitorio a concentraciones menores.

Observaciones microscópicas revelaron que las hifas y el micelio estaban cubiertos por células bacterianas, lo que sugiere una posible asociación entre la agregación bacteriana y alteraciones en el desarrollo de esporangios. Además, se confirmó la presencia del inóculo bacteriano en la rizósfera y el rizoplano de plantas de chile inoculadas. Sin embargo, el pretratamiento de las plantas de chile con JJR198 en distintos momentos previos a la inoculación del oomiceto (7, 3 o 0 días) no redujo la severidad de la enfermedad causada por P. capsici bajo las condiciones evaluadas.

Estos hallazgos resaltan el potencial de biocontrol in vitro de Bacillus zhangzhouensis JJR198 frente a múltiples aislados de Phytophthora; no obstante, su eficacia como inoculante vivo en plantas de chile resultó limitada bajo las condiciones evaluadas. En consecuencia, se requieren estudios adicionales para identificar los factores que restringen el desempeño in planta de JJR198.

Conflicto de interés. Los autores declaran no tener conflictos de interés en la publicación.

Financiamiento. Este trabajo recibió financiación por parte de SECIHTI, número de beca 2022-000002-01NACF-04856 y de la Universidad Autónoma de Aguascalientes a través del proyecto PIBT23-3.

Contribución de los autores. D.F.-R., N.A.C.-V. y J.J.L.-R.: diseñaron el trabajo, D.F.-R.: realizó los experimentos y escribió el manuscrito, N.A.C.-V.: proporcionó financiamiento parcial y recursos, N.A.C.-V., J.J.L.-R. y J.F.M.-D.: corrigieron y aprobaron el manuscrito final, J.F.M.-D.: validó y completó el análisis de datos de la identificación molecular, S.P.F.-P.: proporcionó los aislados de Phytophthora, S.D.T.-Z. refinó las metodologías de laboratorio.