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  • Vol. 2026, 44(1)
  • Artículo Científico

Distribución de Candidatus Liberibacter asiaticus en dosel y raíz de Citrus sinensis en una condición asintomática

por Gustavo Mora Aguilera*, Gerardo Acevedo Sánchez, Verónica Martínez Bustamante, Viridiana López Bautista, Ma. Alejandra Gutiérrez Espinosa, Pedro Robles García

*Autor de Correspondencia.

Recibido: 20/junio/2025 – Publicado: 27/diciembre/2025
DOI: https://doi.org/10.18781/R.MEX.FIT.2506-2

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    • Mora-Aguilera G, Acevedo-Sánchez G, Martínez-Bustamante V, López-Bautista V, Gutiérrez-Espinosa MA, Robles-García P. 2026. Distribución de Candidatus Liberibacter asiaticus en dosel y raíz de Citrus sinensis en una condición asintomática. Revista Mexicana de Fitopatología 44(1):109. https://doi.org/10.18781/R.MEX.FIT.2506-2
    • Mora-Aguilera, G, Acevedo-Sánchez, G, Martínez-Bustamante, V, López-Bautista, V, Gutiérrez-Espinosa, MA y Robles-García, P (2026). Distribución de Candidatus Liberibacter asiaticus en dosel y raíz de Citrus sinensis en una condición asintomática. Revista Mexicana de Fitopatología 44(1):109. https://doi.org/10.18781/R.MEX.FIT.2506-2
    • Gustavo Mora-Aguilera, Gerardo Acevedo-Sánchez, Verónica Martínez-Bustamante, Viridiana López-Bautista, Ma. Gutiérrez-EspinosaA y Pedro Robles-García. 2026. Distribución de Candidatus Liberibacter asiaticus en dosel y raíz de Citrus sinensis en una condición asintomática. Revista Mexicana de Fitopatología 44(1):109. https://doi.org/10.18781/R.MEX.FIT.2506-2
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Resumen Antecedentes/Objetivo. El presente estudio analizó por primera vez la condición asintomática inducida por CLas en Citrus sinensis / C. aurantium a partir de primeros reportes en la región Centro Golfo de México. El objetivo fue analizar con un enfoque mecanístico la concentración espacio-temporal de CLas a nivel planta en condición de huertos comerciales para demostrar la posible implicación de un prolongado periodo de incubación (PI) en la expresión asintomática de HLB.

Materiales y Métodos. Se confinaron dos de tres árboles (A1-A3) (>30 años) de naranjo dulce Valencia asintomáticos positivos a CLas, identificados mediante protocolos oficiales de diagnóstico en San José Acateno, Puebla. En los árboles A2 y A3 se marcaron 13 y 16 ramas secundarias, con un total de 112 y 108 muestras follaje/colecta, respectivamente (total 1540 muestras), obtenidas de la parte distal y proximal de cada rama. Se realizaron siete muestreos mensuales de material vegetal entre mayo-diciembre. A nivel raíz se muestrearon tres categorías por diámetro/función y por combinación de seis sectores distales del tronco (0-280 cm) por 4 de profundidad (0 x 110 cm) con un total de 111 muestras. La extracción de ADN se realizó con CTAB 2 % y cuantificación por qPCR (oligos, HLBp/HLBas).

Resultados. En dosel, la incidencia/ramas en A3 fue 52.2 % (Ct = 22.7 – 34.9) y A2 47.8 % (Ct = 23.4 – 35) sin diferencia estadística (p = 0.48). La carga de inóculo fue 1.6 (±1.3) log-CLas, equivalente a 109 copias/reacción en 100 mL (rango en número de copias 6.3 a 68 870.7). CLas no fue diferente entre muestras distales (1.6 log) y proximales (1.5 log) (p = 0.33). Se encontró fluctuación temporal entre junio – octubre de muestras positivas (37 – 87, p < 0.0001) y de concentración de CLas (1.6 - 3.5 log-CLas, p > 0.72). La distribución de CLas por rama tuvo efecto temporal (p = 0.0001) y por sectores (p = 0.07) evidenciando alta movilidad y estacionalidad. La concentración máxima (Ymax) se encontró asociada al sector medio-superior del dosel, y de alta movilidad hacia sectores inferior y superior en Yinicial y Yfinal. En raíz, se encontró 38.7 % de positividad. La detectabilidad de CLas fue homogénea entre los tipos de raíz (p < 0.0001) pero variable en concentración (p = 0.04). El 47.6, 15.4 y 38.7 % de incidencia en raíz se asoció con 38.3, 43.4 y 9.5 promedio de copias CLas para soporte, conducción y absorción, respectivamente (p = 0.0001). Dos secciones de mayor intensidad-concentración de CLas (80 – 144 copias) se asociaron a raíz en zona media de goteo (160 - 240 cm) y estratos de profundidad medios (50 - 80 cm).

Conclusión. CLas se detectó significativa y consistentemente en tejido vegetal y raíz durante todo el periodo experimental, pero a concentraciones fluctuantes, no incrementales, y análoga entre árboles A2 y A3. La amplia distribución en dosel-raíz sugiere un efecto crónico sistémico. En consecuencia, el periodo de incubación no determina la condición asintomática en el sistema productivo naranjo dulce/naranjo agrio investigado. Otros factores, p.e. inherentes a la variabilidad del patógeno, podrían estar implicados. Estos resultados contribuyen a optimizar un sistema de vigilancia-monitoreo considerando estacionalidad, zona-rama, sector-dosel y tipo de tejido, con mayor probabilidad de detección de CLas aun en una eventual condición asintomática y generan nuevas perspectivas de manejo de CLas. Este es el primer trabajo que analiza PI mecanísticamente, a nivel dosel – raíz, las detecciones iniciales de HLB-asintomático en México en árboles productivos adultos de Valencia C. sinensis / C. aurantium en condiciones de campo.

Palabras clave: CLas, HLB, Carga inóculo, Naranjo dulce, Naranjo Agrio

Cuadro 1. Comparación del número de muestras positivas por qPCR en siete muestreos mensuales realizados en árboles HLB-asintomáticos de Valencia <em>C. sinensis</em> (A2 y A3) durante mayo – diciembre y distribución de carga de inóculo (<em>C</em>Las) por sección proximal y distal de ramas seleccionadas y marcadas para monitoreo bacteriano.
Cuadro 1. Comparación del número de muestras positivas por qPCR en siete muestreos mensuales realizados en árboles HLB-asintomáticos de Valencia C. sinensis (A2 y A3) durante mayo – diciembre y distribución de carga de inóculo (CLas) por sección proximal y distal de ramas seleccionadas y marcadas para monitoreo bacteriano.
Cuadro 2. Número y porcentaje de muestras positivas en árbol A3 a <em>Candidatus</em> Liberibacter asiaticus en <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em> respecto al tipo de raíz, cuatro profundidades de suelo y seis distancias a partir de tronco.
Cuadro 2. Número y porcentaje de muestras positivas en árbol A3 a Candidatus Liberibacter asiaticus en C. sinensis / C. aurantium respecto al tipo de raíz, cuatro profundidades de suelo y seis distancias a partir de tronco.
Figura 1. Estructura de Confinamiento por árbol, HLB-asintomático qPCR <em>C</em>Las positivo, de naranja Valencia <em>Citrus sinensis</em> / <em>C. aurantium</em>. <strong>A</strong>. Estructura metálica de confinamiento (8 x 8 x 8 m) con malla antiáfidos. Las estructuras incluyeron una puerta de acceso restringido mediante llaves; <strong>B</strong>. Sensor HOBO U23 Pro V2 de temperatura (°C) y humedad relativa (HR), programado para mediciones a intervalos de 30 min dentro del área confinada; <strong>C</strong>. Estación climática Davis Vantage para medición de variables climáticas complementarias como precipitación, velocidad y dirección de viento, evapotranspiración, etc.
Figura 1. Estructura de Confinamiento por árbol, HLB-asintomático qPCR CLas positivo, de naranja Valencia Citrus sinensis / C. aurantium. A. Estructura metálica de confinamiento (8 x 8 x 8 m) con malla antiáfidos. Las estructuras incluyeron una puerta de acceso restringido mediante llaves; B. Sensor HOBO U23 Pro V2 de temperatura (°C) y humedad relativa (HR), programado para mediciones a intervalos de 30 min dentro del área confinada; C. Estación climática Davis Vantage para medición de variables climáticas complementarias como precipitación, velocidad y dirección de viento, evapotranspiración, etc.
Figura 2. <strong>A</strong>. Árbol Valencia <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em> HLB-asintomático <em>C</em>Las-positivo confinado en jaulas con malla antiáfidos. Los listones rojos y amarillos muestran la selección y marcaje de ramas primarias (rojo) y secundarias (amarillo) para muestreo mensual en sección proximal o distal de mayo a diciembre. <strong>B</strong>. Ejemplificación de método para la numeración de ramas en el orden de las manecillas de reloj. <strong>C</strong>. Estructura de una rama de cítricos para selección de hojas proximales y distales. Se colectaron un total de 1 540 muestras / árboles A2 y A3.
Figura 2. A. Árbol Valencia C. sinensis / C. aurantium HLB-asintomático CLas-positivo confinado en jaulas con malla antiáfidos. Los listones rojos y amarillos muestran la selección y marcaje de ramas primarias (rojo) y secundarias (amarillo) para muestreo mensual en sección proximal o distal de mayo a diciembre. B. Ejemplificación de método para la numeración de ramas en el orden de las manecillas de reloj. C. Estructura de una rama de cítricos para selección de hojas proximales y distales. Se colectaron un total de 1 540 muestras / árboles A2 y A3.
Figura 3. Sistema de muestreo 3D-seccional para la colecta de raíz en árbol A3, HLB-asintomático qPCR positivo, de <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em>. A. Diseño utilizado para colecta de raíz considerando la distancia proximal al tronco y hasta zona de goteo (0 - 280 cm) y cuatro profundidades (0 – 110 cm). B. Diseño y marcado de los estratos de excavación. C. Delimitación de la zona de excavación y cernido de tierra de los distintos estratos. D. Estratos excavados y muestreados para la selección de muestras de tres tipos de raíz para cuantificación de <em>C</em>Las por qPCR. Un total de 24 bloques de suelo fueron muestreadas (6 x 4) y 111 muestras qPCR-analizadas.
Figura 3. Sistema de muestreo 3D-seccional para la colecta de raíz en árbol A3, HLB-asintomático qPCR positivo, de C. sinensis / C. aurantium. A. Diseño utilizado para colecta de raíz considerando la distancia proximal al tronco y hasta zona de goteo (0 - 280 cm) y cuatro profundidades (0 – 110 cm). B. Diseño y marcado de los estratos de excavación. C. Delimitación de la zona de excavación y cernido de tierra de los distintos estratos. D. Estratos excavados y muestreados para la selección de muestras de tres tipos de raíz para cuantificación de CLas por qPCR. Un total de 24 bloques de suelo fueron muestreadas (6 x 4) y 111 muestras qPCR-analizadas.
Figura 4. <strong>A</strong>. Número de muestras qPCR <em>C</em>Las positivas por árbol (A2 y A3) detectadas en siete fechas de muestreo mensuales de Valencia <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em> HLB-asintomáticos. <strong>B</strong>. Fluctuación temporal de la concentración bacteriana en 21 ramas totales de los árboles A2 y A3. <strong>C</strong>-<strong>D</strong>. Fluctuación temporal de <em>C</em>Las a nivel de rama. Se muestra el ejemplo de 5/13 ramas para A2 (<strong>C</strong>) y 5/16 para A3 (<strong>D</strong>). <strong>E</strong>-<strong>F</strong>. Fluctuación temporal de <em>C</em>Las por rama y árbol A2 (<strong>E</strong>) y A3(<strong>F</strong>). Círculo punteado en rojo muestra el umbral (<em>log</em>-<em>C</em>Las) mínimo para cuantificación de copias de <em>C</em>Las en muestras positivas.
Figura 4. A. Número de muestras qPCR CLas positivas por árbol (A2 y A3) detectadas en siete fechas de muestreo mensuales de Valencia C. sinensis / C. aurantium HLB-asintomáticos. B. Fluctuación temporal de la concentración bacteriana en 21 ramas totales de los árboles A2 y A3. C-D. Fluctuación temporal de CLas a nivel de rama. Se muestra el ejemplo de 5/13 ramas para A2 (C) y 5/16 para A3 (D). E-F. Fluctuación temporal de CLas por rama y árbol A2 (E) y A3(F). Círculo punteado en rojo muestra el umbral (log-CLas) mínimo para cuantificación de copias de CLas en muestras positivas.
Figura 5. Distribución y movimiento espacial de <em>C</em>Las en dosel de árboles HLB-asintomáticos Valencia <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em>. <strong>A</strong>, <strong>C</strong>, y <strong>E</strong>. Mapa de interpolación vectorial que representa la carga bacteriana y la direccionalidad para tres momentos epidémicos: <strong><em>Y<sub>i</sub></em> </strong>(mayo), <strong><em>Y<sub>max</sub></em> </strong>(julio) e <strong><em>Y<sub>f</sub> </em></strong>(diciembre), respectivamente, en <strong>árbol</strong> <strong>A3</strong>; y <strong>B</strong>, <strong>D</strong>, y<strong> F</strong> para el <strong>árbol</strong> <strong>A2</strong>. El tamaño y color de los vectores muestran la tendencia espacial y direccional de carga de inóculo. En cuadros inferiores, el número de copias se relaciona con el tamaño y el color de las flechas como medida de referencia. La direccionalidad del vector simula el movimiento bacteriano en dosel. Los recuadros punteados resaltan mayor concentración espacial de <em>C</em>Las.
Figura 5. Distribución y movimiento espacial de CLas en dosel de árboles HLB-asintomáticos Valencia C. sinensis / C. aurantium. A, C, y E. Mapa de interpolación vectorial que representa la carga bacteriana y la direccionalidad para tres momentos epidémicos: Yi (mayo), Ymax (julio) e Yf (diciembre), respectivamente, en árbol A3; y B, D, y F para el árbol A2. El tamaño y color de los vectores muestran la tendencia espacial y direccional de carga de inóculo. En cuadros inferiores, el número de copias se relaciona con el tamaño y el color de las flechas como medida de referencia. La direccionalidad del vector simula el movimiento bacteriano en dosel. Los recuadros punteados resaltan mayor concentración espacial de CLas.
Figura 6. <strong>A</strong>. Cuantificación de <em>C</em>Las por tipo de raíz: <em>soporte</em>, <em>conducción</em> y <em>absorción</em> en árbol A3 HLB-asintomático <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em>. <strong>B</strong>. Cuantificación de <em>C</em>Las en seis distancias seccionales del tronco entre 80 y 240 cm. <strong>C</strong>. Cuantificación de <em>C</em>Las en cuatro profundidades seccionales de suelo entre 20 – 110 cm. <strong>D</strong>. Cuantificación de <em>C</em>Las integrando los tres factores tipo de raíz, distancia y profundidad. Barras de desviación estándar con letras distintas fueron estadísticamente diferentes mediante ANOVA y comparación de medias <em>Tukey</em> (<em>p</em> = 0.05).
Figura 6. A. Cuantificación de CLas por tipo de raíz: soporte, conducción y absorción en árbol A3 HLB-asintomático C. sinensis / C. aurantium. B. Cuantificación de CLas en seis distancias seccionales del tronco entre 80 y 240 cm. C. Cuantificación de CLas en cuatro profundidades seccionales de suelo entre 20 – 110 cm. D. Cuantificación de CLas integrando los tres factores tipo de raíz, distancia y profundidad. Barras de desviación estándar con letras distintas fueron estadísticamente diferentes mediante ANOVA y comparación de medias Tukey (p = 0.05).
Figura 7. <strong>A</strong>. Análisis geoestadístico <em>3D wireframe</em> de la cuantificación de <em>C</em>Las asociado a un sistema de muestreo 3D-seccional en raíces de <em>soporte</em> (d = 18 mm), <em>conducción</em> (d = 6.3 mm) y <em>absorción</em> (d = 1.5 mm) en árbol A3 Valencia <em>C. sinensis</em> / <em>C. aurantium</em>. <strong>B</strong>-<strong>E</strong>. Análisis geoestadístico <em>Grid Vector</em> Map para representar la movilidad de la carga bacteriana de <em>C</em>Las en muestras de raíces totales (<strong>B</strong>), <em>soporte</em> (<strong>C</strong>), <em>conducción</em> (<strong>D</strong>) y <em>absorción</em> (<strong>E</strong>). Los vectores muestran en tamaño y color la carga de inóculo por región del tipo de raíz analizada. La direccionalidad y magnitud (tamaño) del vector simula la movilización e intensidad de movilidad de <em>C</em>Las a nivel de la estructura de raíz. En el cuadro inferior (B), el número de copias de bacterias se relaciona con el tamaño y el color de flechas como medida de referencia.
Figura 7. A. Análisis geoestadístico 3D wireframe de la cuantificación de CLas asociado a un sistema de muestreo 3D-seccional en raíces de soporte (d = 18 mm), conducción (d = 6.3 mm) y absorción (d = 1.5 mm) en árbol A3 Valencia C. sinensis / C. aurantium. B-E. Análisis geoestadístico Grid Vector Map para representar la movilidad de la carga bacteriana de CLas en muestras de raíces totales (B), soporte (C), conducción (D) y absorción (E). Los vectores muestran en tamaño y color la carga de inóculo por región del tipo de raíz analizada. La direccionalidad y magnitud (tamaño) del vector simula la movilización e intensidad de movilidad de CLas a nivel de la estructura de raíz. En el cuadro inferior (B), el número de copias de bacterias se relaciona con el tamaño y el color de flechas como medida de referencia.